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温敏色谱是一种新型的色谱分离方法,通过调节分离过程中的温度,可以明显改变溶质的分离效果,已在小分子化合物的分离分析中得到了广泛的关注。本论文合成了一系列具有不同最低临界溶液温度(Low critical solution temperature, LCST)的温敏聚合物,研究了盐种类和盐浓度对聚合物LCST的影响。并将温敏聚合物键合在大孔硅胶表面制成温敏疏水色谱固定相,测试了所合成的固定相对蛋白质的分离性能,研究了盐浓度、温度和pH等条件对蛋白质分离的影响,并与常规疏水色谱固定相进行了比较,最后将其应用于鸡蛋清中溶菌酶的分离和纯化。本论文总共分为三个部分：1.绪论：简要介绍了温敏聚合物及温敏色谱固定相,并论述了不同类型的温敏色谱的分离原理,最后对温敏色谱的应用进行了综述。2.温敏聚合物的合成及表征：将N-异丙基丙烯酰胺(NIPAm)与甲基丙烯酸丁酯(BMA)共聚,合成了一系列具有不同LCST的温敏聚合物。研究了温敏聚合物在不同浓度的硫酸铵、氯化钠溶液中LCST的变化,发现温敏聚合物的LCST随着溶液中离子强度的增大而降低。3.温敏疏水色谱固定相的合成、表征及应用：成功合成了一系列具有不同疏水性的温敏疏水色谱固定相,用7种模型蛋白质对其分离性能进行了测试,并与苯基和PEG600常规疏水色谱固定相对比,结果表明所合成的温敏色谱柱对于蛋白质具有更好的分离效果,色谱峰更为尖锐。探讨了温度、硫酸铵浓度、pH等色谱条件对蛋白质分离的影响,发现在较低硫酸铵浓度下,温敏疏水色谱固定相对温度的敏感性更强,通过改变温度可以很好的调节温敏色谱固定相对蛋白质的选择性和分离效果。以溶菌酶为模型蛋白,采用前沿色谱法测定了温敏色谱柱的动态吸附量,发现温敏色谱柱有较好的柱容量。最后,将温敏色谱固定相应用于对鸡蛋清中的Lys的分离纯化,发现在较高温度下,温敏色谱固定相对鸡蛋清中的Lys具有较好的分离效果。