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目的：通过体外骨吸收模型，观察AGE蛋白是否可以激活破骨细 胞引起骨吸收，并分析其作用机制，以寻求AGE蛋白参与骨 代谢导致骨质疏松症的直接证据。方法：用人血清白蛋白和葡萄糖恒温孵育制备人AGE蛋白，通过AGE 自由荧光度的测定加以鉴定，观察分析AGE的形成过程； 通过酶消化法从成人髂骨松质骨分离破骨细胞，通过细胞 形态的观察、TRACP染色、TRACP免疫电镜、玻连蛋白受体 免疫荧光测定等方法证实所分离培养的破骨细胞；在成功 分离培养破骨细胞的基础上，通过酶动力学法测定培养液 内酸性磷酸酶（ACP）和抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）的 活性、运用粘附式细胞仪动态观察破骨细胞内氢离子的变 化、采用甲苯胺蓝染色和图象分析评价AGE对破骨细胞形 成骨吸收陷窝的影响，观察AGE对破骨细胞骨吸收功能的 作用。结果：AGE的生成与葡萄糖的浓度呈正相关，而且呈指数增加趋势； 随着孵育时间的延长，AGE的形成不可逆地累积增加；采用 酶消化法可以有效地分离培养破骨细胞，并可在此基础上 观察AGE对破骨细胞功能的影响，发现低浓度（50～200μ g/ml）AGE蛋白对细胞的ACP和TRACP活性影响不显著，高 浓度（500～1000μg/ml）AGE蛋白对ACP和TRACP活性则 有显著影响（P＜0.01），而且ACP活性的增高主要来自TRACP 活性的增高。低浓度（50μg/ml）AGE就可以引起破骨细胞内 氢离子浓度的升高（p＜0.05），细胞内氢离子浓度随AGE的剂 量增加而升高（P＜0.01）。但只有高浓度的（500～1000μg/ml） AGE蛋白才能促进骨吸收陷窝的面积扩大和数目增加 （P＜0.05）。结论：AGE可以引起体外培养的破骨细胞内氢离子浓度的显著升 高，ACP活性和 TRACP活性增加并促进骨吸收陷窝的形成。 本研究获取了在AGE 的作用下破骨细胞活性增加的直接证 据，说明AGE可通过促进破骨细胞的破骨功能加速骨吸收， 提示AGE有可能是老年性骨质疏松和糖尿病骨质疏松的共 同发病基础。