研究背景多囊卵巢综合征（polycystiC ovarian syndrome，PCOS）是一种发病多因性，病理生理和临床表现多态性的内分泌综合征，是导致育龄期妇女不孕的内分泌及代谢紊乱性疾病。PCOS患者以长期无排卵、高雄激素血症（hyperandrogenemia，HA）、胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）和高胰岛素血症（hyperinsulinemia，HI）为基本特征。其病理生理变化涉及范围广，包括遗传、神经内分泌、糖脂代谢和卵巢局部调节因素等的异常变化，至今其病因和发病机制未完全阐明，是妇科内分泌领域研究的热点之一。近来，对PCOS的研究不再局限于病因方面，PCOS患者特征性内分泌和代谢变化对其子宫内膜的复杂影响已构成了PCOS研究领域中的重要组成部分，为提高PCOS患者的妊娠率，降低流产率提供了新的思路。PCOS患者经促排卵治疗后，其排卵障碍可被成功纠正，但最终妊娠率低，而自然流产率却很高。传统观点认为：子宫内膜是卵巢分泌的甾体激素作用的靶器官，但越来越多的证据发现，子宫内膜具有自分泌和旁分泌作用，自身可分泌多种细胞因子，生长因子、蛋白等。PCOS患者特征性内分泌和代谢变化对其子宫内膜发育和对子宫内膜容受性的影响，逐渐受到众多学者的重视。白血病抑制因子（leukemia inhibitor factor，LIF）在人的卵巢和卵泡液、子宫内膜和蜕膜、滋养细胞和输卵管等生殖器官和部位均表达，被认为是与内膜容受性维持密切相关的生化标志之一。子宫内膜的发育和其容受性的建立需要同源框基因的转录调节。同源框基因（homeobox gene，HOX）中HOXA10作为一种多效性的转录因子参与胚胎种植的多个环节，如：子宫内膜的增殖与分化、子宮内膜容受性的建立、胚胎的定位及黏附、胞饮突形成、蜕膜化等，它的持续表达是胚胎着床和成功妊娠所必需的。PCOS患者内膜容受性是否异常，胚胎和内膜间信号传递是否有缺陷?而体内的HA和HI是否是其内膜容受性异常的直接原因?如何选择提高PCOS患者妊娠率，降低其流产率的最佳治疗方案?针对这些问题，国内尚未见报道。目的1．观察不同组织学分期的正常对照和PCOS患者子宮内膜中LIF、HOXA10的表达情况，探讨LIF和HOXA10与PCOS内膜容受性的关系。2．体外培养高分化子宫内膜腺癌细胞（Ishikawa）作为模式，研究不同浓度的睾酮（testosterone，T）、胰岛素（insulin，INS）作用后，细胞LIF、HOXA10的表达情况。探寻高T和高INS对其表达的影响，试图寻找引起PCOS患者内膜容受性异常的原因，为探讨提高PCOS患者妊娠率，降低其流产率的最佳治疗方案提供依据。材料与方法1．组织学研究：（1）病例组：已婚PCOS患者14例，平均年龄（28.14±3.53）岁。（2）对照组：已婚不孕症患者16例（不孕原因为男方因素或输卵管梗阻，拟行体外受精—胚胎移植治疗），平均年龄（30.86±2.61）岁。PCOS组于月经周期的5-14天和使用氯米芬（clomiphene citrate，CC）／人绝经期促性腺激素（human menopausal gonadotropin，HMG）／人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，HCG）方案促捧卵周期的着床窗口期（阴道超声监测确认排卵后7-8天）；对照组于月经周期的5-14天和自然周期的着床窗口期（阴道超声监测确认排卵后7-8天），均在无菌操作下采集子宫内膜标本。行HE染色证实分期，并采用免疫组织化学染色法（immunohistochemical method）检测LIF、HOXA10表达情况。2．细胞培养：体外培养Ishikawa细胞，分别采用浓度为10^-8mol／l、10^-6mol／l、10^-4mol／Ll的T溶液作用细胞24小时和48小时，使用免疫细胞化学法（immunocytochemical method）检测不同浓度组和不同时间组LIF、HOXA10表达情况，并使用酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测各组细胞培养上清液中LIF的水平。分别采用浓度为10IU／l、30IU／l、90IU／l的INS溶液作用细胞24小时，使用ELISA法检测各浓度组细胞培养上清液中LIF的水平。3．统计学分析：实验数据应用SPSS10.0统计软件进行统计分析，以α=0.05作为差异有无统计学意义的检验水准。结果1．研究对象一般情况比较：PCOS组与对照组相比，年龄、体重质量指数（body mass index，BMI）的差异均无统计学意义（t₁=-1.635，P＞0.05；t₂=1.448，P＞0.05）。2．研究对象子宮内膜病理比较：PCOS组间质反应不良和分泌反应欠佳发生率均高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05；P＜0.01）。3．LIF在两组子宫内膜的表达：LIF以腺上皮细胞的胞浆表达为主。LIF在PCOS组增生期和分泌中期子宫内膜的表达水平均低于相应的对照组（P＜0.01）；而LIF在两组分泌中期的子宫内膜的表达水平均高于其增生期（P＜0.01）。4．HOXA10在两组子宫内膜的表达：HOXA10在内膜间质细胞的胞核呈阳性表达。HOXA10在PCOS组增生期和分泌中期子宫内膜的表达水平均低于相应的对照组（P＜0.01）；而HOXA10在两组分泌中期的子宫内膜的表达水平均高于其增生期（P₁＜0.05；P₂＜0.01）。5．LIF与HOXA10的相关性：PCOS组和对照组中，LIF与HOXA10的表达水平均呈正相关（r₁=0.753，P＜0.01；r₂=0.565，P＜0.05）。6．LIF、HOXA10在Ishikawa细胞的表达：LIF在Ishikawa的胞浆呈阳性表达，HOXA10在Ishikawa的胞核呈阳性表达。7．T作用Ishikawa后，对LIF、HOXA10表达的影响：作用时间相同时，除10^-8 mol／L的T作用组与对照组间LIF表达无差异外（P＞0.05），余各组间，较低浓度T作用组LIF表达明显高于较高浓度T作用组（P＜0.01）；而作用浓度相同时，T呈时间依赖性抑制LIF的表达（t=7.672，P＜0.01）。同样，T呈浓度和时间依赖的方式抑制HOXA10的表达（F=19.71，P＜0.05；t=9.516，P＜0.01）。且T呈浓度和时间依赖的方式抑制Ishikawa细胞培养上清液中LIF的表达（F=37.379，P＜0.01：t=5.293，P＜0.05）。8．INS作用Ishikawa后，对LIF表达的影响：对照组细胞培养上清液中LIF的表达水平均高于各INS作用组（F=23.70，P＜0.01）；而3组不同浓度的INS作用组间则无差异（P均＞0.05）。结论1．LIF和HOXA10在PCOS组和对照组子宫内膜均呈阳性表达，分泌中期表达强度高于增生期，提示LIF和HOXA10可能是子宮内膜容受性的潜在标志物。2．LIF、HOXA10在PCOS组各期的子宮内膜中均呈低水平表达，可能预示PCOS患者的内膜容受性异常，影响胚胎着床和生长发育。3．T可呈浓度依赖和时间依赖的方式抑制Ishikawa细胞LIF、HOXA10的表达，INS作用的Ishikawa细胞培养上清液中LIF呈低水平表达．均提示PCOS固有的HA和HI可成为影响其内膜容受性的因素之一，造成PCOS患者不良的生殖结局。