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单分散交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯／甲基丙烯酸乙二醇酯P(GMA-EDMA)微球的疏水性比交联聚苯乙烯弱且其表面含有丰富的环氧基，改性后会衍生出大量的羟基，特别适合于生物大分子的分离纯化。8微米左右的表面多孔P(GMA-EDMA)微球可作为高效液相色谱柱填料中的基质材料。亲和色谱是一种高效简便的蛋白纯化分离技术，高效亲和色谱(HPAC)是在经典亲和色谱技术上结合高效液相色谱(HPLC)特点发展起来的一个新技术，它具有分离速度快、分析检测简单、较好的分离效果和较高的回收率等优点，适用于批量样品的分析和制备。本文将P(GMA-EDMA)微球作为高效液相色谱的基质材料，三嗪染料作为拟生物亲和配基，两者耦联成为一种新型的染料配基亲和色谱填料并将其用于对蛋白质纯化分离，主要做了以下研究工作：1，以分散聚合法制备的2微米聚苯乙烯微球为种子，GMA、EDMA为单体，用一步种子溶胀法制备了表面多孔的P(GMA-EDMA)微球。分别研究了制备种子和微球的影响因素，并对微球进行了性能表征。实验结果表明，当溶胀倍数为30左右，交联剂含量为45％，单体与致孔剂比为1.25时所制备的微球在7微米左右，粒径单分散，表面多孔，刚性好，适合用做高效色谱柱填料。2，以自制P(GMA-EDMA)微球为基球，共价耦联两种染料配基CB F3GA和PB MX-R，制得了两种高效亲和色谱填料PB MX-R-P(GMA-EDMA)和CB F3GA-P(GMA-EDMA)，对其进行性能表征。研究了染料耦合的最佳反应条件，实验表明制得的染料树脂性能稳定，在酸性碱性溶液中没有泄漏情况。3，用匀浆法将所制的两种染料亲和色谱填料填装成高效亲和色谱柱，研究了两种染料亲和色谱柱分离蛋白样品的色谱条件、分离选择性、稳定性、色谱柱柱压、柱子的样品负载量和样品回收率等。在10×0.46 cm的PB Mx-R-P(GMA-EDMA)色谱柱上，探讨了pH、流速、离子强度和有机修饰剂对溶菌酶分离的影响，得出目标蛋白溶菌酶的最佳淋洗条件为含1.0 mol／LNaCl、15％乙二醇，pH7.8的Tris-HCl缓冲液为淋洗液，流速为0.5ml／min。在最佳淋洗条件下对不同浓度溶菌酶进行测定，该高效亲和色谱柱具有良好的线性、重现性、稳定性等色谱性能。实际应用中，它能将鸡蛋清样品中的溶菌酶成功分离。在25×0.46 cm的CB F3GA-P(GMA-EDMA)色谱柱上，测得溶菌酶在1.0 ml／min流速下的动态最大吸附量为45.3 mg／ml。牛血清蛋白和溶菌酶蛋白混合标样在此色谱柱上能很好分离，过氧化氢酶标样蛋白也能得到分离。在实际应用中，它能将鸡蛋清样品中的溶菌酶成功分离，而且将油菜花粉初提物中的糖蛋白成功的分成三个蛋白峰。