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目的人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,h BMSCs)是具有多向分化潜能的非造血来源多能干细胞,它在特定条件下,可向骨细胞、脂肪细胞及神经元细胞等方向分化。此类细胞易于分离、培养以及扩增,扩增后仍保留分化潜能,并且具有低免疫原性、免疫调节功能、易于转染和稳定表达外源基因等特征。因此,它有望应用于牙根吸收、牙槽骨丧失等组织修复的治疗。micro RNAs(mi RNAs)是一类长约为16~25 bp的非编码RNA,能够调控特定的靶基因表达。大量研究表明,干细胞的增殖、分化等均处于mi RNAs的调控之中。本课题通过体外及体内实验对mi R-10a-5p进行功能验证,明确其在h BMSCs向成骨方向分化中的生物学作用,为h BMSCs作为种子细胞提高分化能力提供理论依据。方法1.利用免疫细胞化学、成骨/成脂诱导染色鉴定复苏传代后的h BMSCs的来源及分化能力。2.利用化学合成的mi R-10a-5p模拟物和抑制物瞬时转染h BMSCs,改变h BMSCs中mi R-10a-5p的表达量。使用人骨髓间充质干细胞成骨诱导液诱导转染后的h BMSCs分化成骨,对成骨相关蛋白进行转录和翻译水平检测。3.成骨诱导上调/下调h BMSCs中mi R-10a-5p表达并孵育于HA-TCP支架植入8 w雌性BABL/c裸鼠背部,常规饲养8 w后取材切片,行Goldner’s三色染色,检测体内矿化能力的差异。1.h BMSCs阳性表达间充质干细胞表面标志物CD44,而阴性表达造血干细胞标志物CD34;同时经成骨诱导21 d茜素红矿化染色显示,诱导组红染的矿化结节明显多于对照组;成脂诱导21 d后油红O染色显示,诱导组的橘红色脂滴较对照组多。2.体外实验表明,经成骨诱导培养上调/下调mi R-10a-5p的h BMSCs表达量,上调组ALP、RUNX2成骨相关基因表达量显著降低,而下调组表达上升。3.体内实验切片染色结果同对照组相比,下调组的矿化程度高于对照组,而上调组仅处于矿化早期阶段。结果结论1.h BMSCs为间充质组织来源,而非造血组织来源,并且具有多向分化潜能。2.mi R-10a-5p负性调控h BMSCs成骨方向分化。