成人乳腺干细胞体外分离、培养、生物学特性鉴定及基因组不稳定性的研究

来源 :吉林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:LUXU_ZHANG
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本实验通过体外分离、培养并鉴定一种乳腺细胞亚群,观察其生长特征并进行微卫星MARKER的检测分析,证明了该细胞的干细胞特性和多种生物学特点,基因特点及其分子生物学方面的安全性。第一部分实验通过免疫磁株技术,对乳腺癌患者癌旁正常组织进行体外培养,并分离出乳腺上皮细胞(导管上皮细胞和肌上皮细胞)。其中导管上皮细胞的一个亚群可以向肌上皮细胞转化,通过三维培养可以形成类似的乳腺终末导管结构。通过免疫组化染色对分离的细胞亚群进行鉴定染色。并通过多种方法对细胞的其他生物学特性进行了鉴定。证实了免疫磁株技术分离得到这种导管上皮细胞亚群具有成体干细胞特性。第二部分实验对分离培养后的乳腺细胞亚群进行微卫星方面的检测,通过对15例乳腺癌患者的癌旁组织所培养的乳腺干细胞,癌组织中抽取的乳腺癌细胞,及外周血中的正常白细胞进行微卫星MARKER的检测,并进行统计学分析后。证实了分离的乳腺细胞亚群与同源外周血细胞在基因组的稳定性方面基本相同,无恶性变的趋势,从分子生物学的角度证明了其安全性。为下一步动物实验做好了基础。并通过与同源癌细胞已知癌基因和抑癌基因的微卫星杂合性缺失(LOH)比较,发现了7号染色体短臂上的一个新的LOH位点,推测可能在这里也存在着一种或几种乳腺癌的癌基因或抑癌基因。本实验初步分离出具有成体干细胞特性的乳腺导管上皮细胞亚群,并对其细胞表面标记物进行免疫组化染色鉴定,以及其他生物学特性方面的鉴定。并对分离的乳腺细胞亚群进行了基因组方面的检测与分析,证明了这种干细胞不具有恶性变的趋势,为下一步动物实验做好了准备。
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