秦巴蛹虫草诱变选育及白化菌株生物学特性的研究

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秦巴蛹虫草(Cordyceps militaris)为麦角菌科(Clavicipitaceae)虫生真菌,生长在陕西秦巴山区,其药效成分有虫草素、虫草多糖等,具多种生理活性。本文通过对秦巴蛹虫草原生质体进行诱变并筛选再生菌株,以期得到高产虫草素的秦巴蛹虫草再生菌株,并对菌株栽培中出现的白化变异菌株的生物学特性进行研究。主要研究结果如下:1.对6株秦巴蛹虫草菌株进行栽培,采用模糊综合评判法比较其生产性能。结果表明:CM-16和WY-1为优良菌株,选择CM-16作为诱变的出发菌株。2.研究酶解条件对秦巴蛹虫草原生质体制备及再生的影响,并依据结果进行正交组合试验,确定原生质体制备的最适条件。结果表明:以0.6mol/L NaCl作为稳渗剂,采用混合酶系(26±1)℃酶解菌龄6d的菌丝体3h,其原生质体的产量最高;以0.6mol/L甘露醇作为稳渗剂,采用混合酶系(26±1)℃酶解菌龄5d的菌丝体2h,其原生质体的再生率最高。3.研究秦巴蛹虫草原生质体诱变条件,确定最适诱变条件分别为照射距离300mm下50W紫外灯处理23.5~31.5s,0.6mol/L亚硝酸处理9.6~13.4min。4.采用虫草素细菌敏感株作为指示菌筛选高产虫草素再生菌株,研究再生菌株的生物学特性及生产性能。结果表明,细菌No.34可作指示菌,经16S rDNA鉴定为嗜线虫沙雷氏菌(Serratia nematodiphila)。经复筛得到再生菌株M4、M9、M30、M32、M41,其中M4、M30、M32生物学效率均在80%以上,且发酵液中虫草素含量显著提高,是优良再生菌株,值得进一步研究。5.研究白化菌株WH-1的生物学特性及生产性能。结果表明,菌株WH-1与其亲本CM-16的菌丝生长温度、培养基初始pH及生物量均无明显差异。白化菌株WH-1子座虫草素含量高,生产周期短,形态优良,值得进一步研究。
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