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实验一米诺环素对伴放线共生放线杆菌抑菌作用的研究目的：检测MINO对Aa的最小抑菌浓度,避免因MINO使用剂量不足造成无法清除Aa的感染并造成菌株的耐药。方法：复苏菌种,涂布平板,测定Aa生长对数期、生长曲线。琼脂稀释法测定MINO对Aa的MIC。结果：细菌接种后24h细菌的生长浓度与OD值呈对数线性关系,1-24h时增殖缓慢,48-84h增殖活跃,96h有下降的趋势。MINO对Aa的MIC是8mg／L。结论：MINO对Aa具有抑菌作用,MIC是8mg／L。实验二米诺环素对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用目的：探索hPDLF的体外培养方法并进行鉴定。通过检测MINO对hPDLF细胞增殖、细胞周期和对总蛋白、Ⅰ型胶原(COLI)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)的影响,探讨MINO牙周局部给药的效应浓度范围。方法：选用因正畸需要拔出的前磨牙牙周膜组织为原代培养的组织来源,组织块法、酶消化法、盖玻片固定相结合进行hPDLF原代培养,波形丝蛋白、角蛋白、S-100因子免疫荧光染色进行细胞鉴定。加入矿化液诱导后钙结节染色探讨成骨特性。将不同浓度的MINO(0、10、20、40、100、200mg／L)分别作用于第5代hPDLF,孵育1、4、7、10、14d后MTT法检测细胞增殖；孵育4d后,流式细胞仪检测细胞周期；BCA法检测细胞总蛋白；荧光定量PCR和Western-blot法检测COLI、ALP、OCN的基因表达和蛋白表达。结果采用SPSS 13.0软件包进行分析。结果：体外培养的hPDLF波形丝蛋白染色阳性,角蛋白、S-100因子染色阴性,证实为hPDLF。hPDLF在矿化液诱导下可形成矿化结节,表现出成骨特征。以第5代hPDLF为研究对象：10～200mg／L MINO显著促进其增殖和有丝分裂(P<0.05),100mg／L为最大效应浓度；20～200mg／L MINO呈浓度依赖性促进总蛋白和COLI基因表达和蛋白表达(P<0.05),10mg／L MINO总蛋白和COLI基因表达和蛋白表达高于对照组,但无统计学差异(P>0.05)；40～200 mg／L时MINO抑制ALP和OCN基因表达和蛋白表达(P<0.05),10～20mg/L MINO对ALP和OCN基因和蛋白表达无抑制作用(P>0.05)。结论：组织块法、酶消化法、盖玻片固定相结合进行hPDLF原代培养可获得大量高纯度的hPDLF,细胞活性好,增殖能力强。hPDLF可通过矿化液诱导表达成骨特性。在10～20mg／L的浓度范围内,MINO促进hPDLF增殖和有丝分裂,促进总蛋白和COLI,对ALP和OCN无抑制作用。根据本研究结果综合考虑,10～20mg／L可作为MINO牙周局部给药的效应浓度范围。