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目的分离、培养及鉴定原代大鼠髁突软骨细胞,建立二氯化钴（CoCl2）化学低氧的细胞培养模型,研究体外常氧与低氧条件下培养髁突软骨细胞低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）、聚集蛋白聚糖酶-1（aggrecanase-1）和金属蛋白酶抑制剂-3（tissue inhibitor of metalloproteinase-3, TIMP-3）的表达变化,探讨其在髁突软骨发育中的意义。方法（1）采用机械分离、胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶联合消化,从三周龄SD大鼠髁突分离出软骨细胞,并进行原代和传代培养;倒置显微镜观察细胞的形态及其生长情况,MTT比色法绘制髁突软骨细胞的生长曲线,利用Ⅱ型胶原免疫组织化学染色和甲苯胺蓝染色进行鉴定。（2）运用含不同浓度CoCl2的培养基75μmol/L（A组）、125μmol/L（B组）、175μmol/L（C组）以及0μmol/L（常氧组）分别进行细胞培养,48h后测定并比较各组的乳酸脱氢酶（LDH）释放率,建立CoCl2化学低氧的细胞培养模型。（3）采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测常氧状态下与低氧后12h、24h、48h各个时间段原代大鼠髁突软骨细胞HIF-1α、VEGF、aggrecanase-1和TIMP-3的mRNA的表达差异。结果（1）此方法分离每只大鼠髁状突关节可以获得1×104～4×104个软骨细胞,台盼蓝染色获得的原代细胞存活率达到95%。甲苯胺蓝染色可见髁突软骨细胞核被染成深蓝色,胞浆及细胞外基质被异染成紫红色。Ⅱ型胶原免疫组化染色可见髁突软骨胞质出现阳性染色。（2）在48h时间点上,随着CoCl2的浓度增高,LDH释放率增高,C组的LDH释放率明显高于常氧组（P<0.01）,A组、B组的LDH释放率分别与常氧组比较差异无统计学意义（P>0.05）。（3）半定量RT-PCR结果显示,在常氧条件下培养的髁突软骨细胞HIF-1α、VEGF、aggrecanase-1和TIMP-3均有表达;与常氧条件下相比,髁突软骨细胞在低氧条件下培养,在低氧后12h、24h、48h时间点HIF-1α（P<0.05）、VEGF（P<0.01）的mRNA表达明显升高;并且VEGF（P<0.01）、HIF-1α（P<0.05）在12h与24h、12h与48h、24h与48h比较表达均有统计学差异;HIF-1α表达逐次升高,而VEGF在12 h达到最高点后逐次下降,但是均高于常氧状态下。Aggrecanase-1和TIMP-3的表达在各个时间点之间与常氧状态下没有统计学差异。结论（1）本研究培养髁突软骨细胞获取大量存活率高的软骨细胞。（2）LDH释放率结果提示175μmol/L处理软骨细胞后对细胞产生严重的损伤,不适用于建立低氧模型,而由于大多数文献报道75μmol/L CoCl2产生的低氧效果不如125μmol/L CoCl2,所以最终确定125μmol/L作为建立低氧模型的浓度。利用CoCl2建立的髁突软骨细胞化学低氧模型,简单、稳定并且易于操作。（3）低氧极早期可上调髁突软骨细胞HIF-1α、VEGF mRNA表达。但是aggrecanase-1和TIMP-3的表达是多因素调节的结果,体外的缺氧模型尚不能完全模拟体内精细复杂的调控机制,低氧极早期对髁突软骨aggrecanase-1和TIMP-3 mRNA的表达无明显影响。HIF-1α、VEGF与髁突软骨细胞适应低氧环境密切相关,可能在髁突软骨血管形成以及生长发育发挥重要作用。但随时间延长,VEGF的表达并未随HIF-1α逐渐升高。