拟南芥转录因子TCP8在CRY2介导下对ICS1基因表达的调控分析

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植物病害的形成是由病原菌、感病寄主和适宜环境条件同时作用的结果。植物对病原菌的防御受到多种环境信号的调控,如温度、湿度、光以及昼夜节律等。光调节的植物免疫主要受光合作用和光受体信号的介导。在植物光受体介导光信号调控植物免疫方面,首先得到证明的是光敏色素与植物免疫的关系:对于无毒菌株Pst DC3000 avr Rpt2,phy Aphy B双突变体拟南芥(Arabidopsis thaliana)表现出了过敏反应减弱和感病性增强的表型。然而,拟南芥蓝光受体隐花色素2(Cryptochrome2,CRY2)对于植物免疫的调控的研究仅停留在对R蛋白HRT泛素化的降解的研究上。本研究利用CRY2作为诱饵蛋白,通过酵母筛库的方法筛选获得了互作蛋白TCP8。TCP8可通过结合于ICS1启动子上的方式来调控ICS1的表达从而促进植物的系统获得性免疫反应。因此我们进一步研究了TCP8对ICS1的调控是否依赖于CRY2。具体研究结果如下:1.利用CRY2作为诱饵蛋白在蓝光诱导下通过酵母筛库的方法筛选出互作蛋白TCP8,并利用酵母双杂组氨酸营养缺陷型实验和CPRGβ-半乳糖苷酶活性分析实验进一步证明了CRY2与TCP8的蓝光特异性互作。利用人胚肾细胞(HEK293T)共表达两种蛋白进行Co-IP实验再次证明了CRY2与TCP8的互作,但互作并没有蓝光响应。通过植物Co-IP实验证明了CRY2和TCP8在植物体内的互作。2.注射病原菌Pst DC3000于Col4、cry2、cry1cry2、GFP-CRY2拟南芥叶片中,在注射后3天,观察不同基因型拟南芥的病症和Pst DC3000在不同基因型拟南芥下的生长情况;随后在蓝光下于不同时间点取注射后的野生型叶片测ICS1的表达量。我们发现cry2,cry1cry2与野生型拟南芥Col4相比表现出更易感病的表型,而GFP-CRY2过表达拟南芥对病原菌的抗性有显著的增强;并且拟南芥ICS1的表达量表现出蓝光的诱导增强的现象。3.比较ACT2::GFP-TCP8/Col4、ACT2::GFP-TCP8/cry2、Col4和cry2四种拟南芥植株分别处于黑暗条件和蓝光条件下时ICS1表达量的变化趋势;又利用HEK293T细胞荧光素酶活性实验,证明了TCP8对于ICS1的调控依赖于CRY2,可能不依赖蓝光,并可能依赖于LWD(LIGHTREGULATED WD)。
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