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三角褐指藻是一种重要的硅藻,它是目前人工养殖各种海洋动物的优良饵料之一,在全世界范围内均有广泛的分布。由于海洋经济产业的迅速发展,客观上需要三角褐指藻的人工养殖技术水平的不断提高,然而目前由于外部环境的变化以及人工养殖条件的限制,三角褐指藻的正常生长发育受到了严重的影响,在众多的环境因素当中,低温胁迫是影响三角褐指藻生长发育的重要因素之一。胚胎晚期丰富蛋白是植物体胚胎发育后期种子中大量积累的一类低分子量蛋白,在植物体受到低温、干旱和盐胁迫后造成脱水的营养组织中有所表达,它能够有效的增强植物抗寒、耐旱、抗盐的能力;参与植物体内渗透调节和水分运输;保护植物细胞结构;并能起到分子伴侣的作用。
本研究在温度分别为3、6、9、20℃的条件下培养三角褐指藻,测定其细胞密度、生物量、叶绿素a含量、脯氨酸含量、丙二醛含量及可溶性糖含量等生理指标在3、6、9、12、15天的变化情况。结果表明:在不同的低温胁迫条件下,三角褐指藻的细胞密度和生物量均明显低于对照组,其细胞密度和生物量的变化趋势基本一致;叶绿素a含量处理前3天有所上升,没有明显低于对照组,处理6天后明显下降;脯氨酸含量、丙二醛含量、可溶性糖含量均有显著上升。
通过RT-PCR技术从三角褐指藻克隆到一个Lea基因的序列片段,并利用3’RACE-PCR方法克隆到该基因的3’末端,包括其功能域部分。采用实时定量PCR技术分析了在不同低温条件下三角褐指藻该基因的表达水平,结果表明:该Lea基因在低温条件下迅速表达,温度越低,其表达量越高。以上研究结果为进一步揭示三角褐指藻抗低温的分子机制和培育抗低温三角褐指藻新品种提供了一定的理论依据。