黔产金樱子多糖和鞣质含量分析及SCoT-PCR体系优化

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目的:改进和优化金樱子多糖和鞣质的提取工艺,测定并分析贵州省不同产地金樱子多糖和鞣质含量,为建立和完善金樱子质量评价指标提供一定的科学依据;建立和优化金樱子SCoT-PCR反应体系,为后续金樱子DNA分析奠定基础。  方法:利用星点设计-响应面法优化金樱子多糖和鞣质的超声提取工艺;采用紫外-分光光度法在波长490nm处测吸光度,对照品为葡萄糖,显色剂为硫酸-苯酚溶液,根据标准曲线计算各个不同产地金樱子多糖含量,并通过线性与范围、稳定性、精密度、重复性、加样回收率试验进行方法学研究;采用紫外-分光光度法在波长760nm处测吸光度,对照品为没食子酸、显色剂为磷钼钨酸、吸附剂为干酪素,根据标准曲线上计算各个不同产地金樱子鞣质含量,并通过线性与范围、稳定性、精密度、重复性、加样回收率试验进行方法学研究。以产自贵州都匀的金樱子幼叶为试验材料,通过L16(45)正交试验设计对SCoT-PCR反应体系中Mg2+、模板DNA用量、dNTPs、Taq DNA聚合酶和引物五因素进行四水平优化。  结果:多糖和鞣质含量测定方法经过方法学研究,符合相关的检测要求。多糖的优选工艺:超声时间60min,温度75℃,液料比30:1;多糖含量:13号产地(龙里县)的金樱子多糖含量最高达43.33%,7号(凤冈县)和12号(独山县)两个产地所产金樱子多糖含量最低,分别为29.11%、29.38%,均符合2010年版《中国药典》规定的要求;鞣质的优选工艺:温度控制在50℃左右为前提,乙醇浓度75%,液料比30:1,超声时间60min;鞣质含量:18号产地(修文县)的金樱子鞣质含量最高,达23.58%,5号产地(丹寨县)的金樱子鞣质含量最低,9.78%;金樱子SCoT-PCR的优化反应体系:Mg2+2.0mmol/L,DNA模板2.5ng/μL,dNTPs0.3mmol/L,引物0.6μmol/L,Taq DNA1.5U。  结论:金樱子多糖和鞣质优化的超声提取工艺科学合理、简单,可作为修订金樱子多糖和鞣质提取工艺的依据;通过对贵州20个不同产地金樱子多糖和鞣质含量测定的研究分析,为黔产金樱子开发利用提供了理论依据;金樱子SCoT-PCR反应体系的建立与优化,为进一步进行金樱子种质资源鉴定,遗传多样性的分析等研究工作提供技术支持。
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