和厚朴酚联合阿糖胞苷在急性髓系白血病中的作用及机制

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目的:研究和厚朴酚联合阿糖胞苷在急性髓系白血病细胞株THP-1细胞增殖和凋亡的协同作用,探索其潜在的抗急性髓系白血病机制,为治疗急性髓系白血病提供新的方法。方法:细胞形态学观察和厚朴酚或阿糖胞苷单独或联合作用对THP-1细胞形态的影响;CCK8法和流式细胞术(细胞凋亡和周期)检测二者单独或联合作用于THP-1细胞对细胞增殖和凋亡的影响;Apolive-GloTM双重检测分析单药或联合用药处理对细胞活力和caspase3/7表达的影响;MicroRNA基因芯片分析二者单独或联合作用对THP-1细胞MicroRNA的表达的影响,以及靶基因的预测、筛选与鉴定;采用单因素方差分析(one way ANOVA),以P<0.05作为有差别统计学意义。结果:(1)细胞形态学观察结果显示,和厚朴酚或阿糖胞苷单独或联合作用36小时,都可以对THP-1细胞形态产生影响,其中联合用药组细胞形态变化更为明显;(2)CCK-8结果显示:和厚朴酚6μmol/l和8μmol/l单独作用时,对THP-1细胞增殖有抑制作用;单用1μmol/l阿糖胞苷时抑制作用不明显;二者联合后,与单用和厚朴酚及正常组分别比较,2μmol/l,4μmol/l及6μmol/l和厚朴酚联合1μmol/l阿糖胞苷时,差别具有统计学意义(P<0.05);(3)流式细胞术分析结果显示:和厚朴酚在2μmol/l,4μmol/l及8μmol/l浓度下单独作用36小时,THP-1细胞的总凋亡率(早期凋亡率+晚期凋亡率)分别为8.37±0.61%,11.78±0.82%,46.67±0.69%,阿糖胞苷单药处理组和正常对照组分别为12.81±0.35%和6.64±0.87%,仅高浓度和厚朴酚(8μmol/l)作用时可诱导细胞发生明显凋亡;然而和厚朴酚联合1μmol/l阿糖胞苷处理36小时后,THP-1细胞总凋亡率依次为24.8±0.73%,26.49±1.85%及48.774±1.55%,与单药组和正常对照组相比,其诱导细胞凋亡效应更加明显;(4)细胞周期方面:和厚朴酚单独作用于THP-1细胞12小时后,可以使细胞阻滞在GO/G1期,下调S期细胞比例,且与浓度成正相关,联合阿糖胞苷组较单药组有显著统计学差异(P<0.05);(5)双重检测结果显示,和厚朴酚可抑制THP-1细胞活力,激活caspase3/7表达,诱导细胞凋亡,而联合阿糖胞苷后这种效应显著增强;提示二者联合在抑制细胞活力和促进细胞凋亡方面有协同作用;(6)MicroRNA结果显示和厚朴酚单药或阿糖胞苷单药或二者联合用药可引起THP-1细胞中约100种以上的miRNA发生明显上调或下调,进而发挥抗急性髓系白血病效应,主要涉及了MAPK信号通路和癌症信号通路等信号途径。结论:和厚朴酚或阿糖胞苷单独作用在抑制THP-1细胞增殖,诱导细胞凋亡方面有一定的作用,二者联合用药后时具有显著的协同作用,提示和厚朴酚联合阿糖胞苷在治疗急性髓系白血病方面有重要意义。
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