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目的:1.了解结核分枝杆菌 H37Ra 和卡介苗(BCG)免疫小鼠后细菌在小鼠体内的定植,及诱导小鼠产生的特异性细胞免疫应答。2.探讨 H37Ra 和 BCG 诱导巨噬细胞产生一氧化氮(NO)的能力,以及细菌在巨噬细胞内生存的能力和破坏巨噬细胞的能力。 方法:1.将 H37Ra 和 BCG 分别皮内接种 BALB/c 小鼠,免疫 15d、30d 及 60d 后,取稀释小鼠脾脏和肺脏匀浆接种罗氏培养基,培养 18d后计 CFU(菌落形成单位);免疫 30d 和 60d 后,取小鼠脾淋巴细胞体外培养并用 PPD 刺激,MTT 法检测脾淋巴细胞转化试验,ELISA 法检测培养上清液中 IFN-γ的产量。2. H37Ra 和 BCG 分别感染 BALB/c 小鼠腹腔巨噬细胞、RAW264.7 细胞株及 THP-1 细胞株, 24h 后取培养上清液,Griess 法检测 NO 的释放量;分别于感染后的 0、4d 及 7d 用 1%TritonX-100 裂解巨噬细胞后接种罗氏培养基,培养 18d 后计 CFU;同时于每个时间点,用 MTT 法检测巨噬细胞存活率的变化。 结果:1.免疫接种后,H37Ra 和 BCG 均可在 BALB/c 小鼠脾脏和肺脏内至少存活 60d。免疫 30d 或 60d 后,脾淋巴细胞刺激指数和 IFN-γ产量检测发现 H37Ra 接种组或 BCG 接种组显著高于未免疫组(P<0.05);H37Ra 接种组 IFN-γ产量显著高于 BCG 接种组(P<0.05)。2. H37Ra 和 BCG 均可诱导 BALB/c 小鼠腹腔巨噬细胞、RAW264.7 细胞株及 THP-1 细胞株产生多量的 NO,H37Ra 感染组或 BCG 感染组显著高于对照组(P<0.05); H37Ra 感染组稍高于 BCG 感染组,但两者无显著性差异(P>0.05);H37Ra 和 BCG 均可在巨噬细胞内生存繁殖;H37Ra或 BCG 的感染降低巨噬细胞的存活率,随着感染时间的延长细菌破坏