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镉是自然环境和工业环境中毒性最强的污染物之一,其半衰期长、排泄率低、蓄积能力强,能够由食物链不断蓄积,进而增强其对人类和动物健康的危害。肝脏是镉蓄积和毒性作用的主要靶器官之一,肝细胞是镉主要侵害的靶细胞之一,肝脏又被称为硒库,饲料中硒能够拮抗镉的肝毒性,但其具体机制仍不清楚。钙稳态与细胞功能与存活密切相关。为了揭示硒拮抗镉致肝细胞毒性效应的机制,本研究以LMH细胞为试验对象,在培养体系中加入硒与镉,并加入2-APB抑制钙离子通道,采用MTT、MDC、q RT-PCR、流式细胞术及western blot等方法,对细胞活性、内质网应激、细胞自噬、钙离子调控等相关指标进行了检测。研究表明:(1)成功表达了鸡CNX和CRT蛋白抗原多肽,制备了兔抗鸡CNX和CRT多克隆抗体,建立了检测肝细胞及组织中CNX和CRT蛋白表达水平的Western blot方法。(2)镉与硒致LMH细胞的24 h半数抑制浓度分别为3.18μM和15.24μM,表明LMH细胞对镉具有高度敏感性,在镉硒比为2:1和1:1时,硒均能够拮抗镉致肝细胞毒性作用。(3)镉可以干扰内质网应激标志分子ATF4、ATF6、GRP78、GRP94 m RNA表达,即镉能够诱导LMH细胞内质网应激,同时镉也可以增加LMH细胞自噬泡的数量及自噬标志分子Beclin1、P62、ATG3、ATG5和ATG9基因表达,而硒能够有效拮抗这些指标变化,表明镉能够诱发LMH细胞内质网应激和自噬,这是镉发挥毒性作用的重要机制之一,硒能够通过有效抑制内质网应激与自噬来发挥拮抗效应。(4)镉能够干扰LMH细胞内游离钙离子含量、Ca M与Ca M-IV基因表达,增加CNX与CRT基因及蛋白表达水平,而硒能够有效拮抗这些指标变化,表明镉能够诱发LMH细胞钙稳态调节紊乱,这是镉发挥毒性作用的重要机制之一,硒能够通过有效抑制钙稳态紊乱来发挥拮抗效应。(5)应用钙池操纵钙通道抑制剂2-APB建立钙释放阻断细胞模型,染镉后,细胞毒性、内质网应激、自噬现象均有所减轻,表明钙稳态失衡是镉发挥毒性作用的关键机制,同时硒的拮抗效应也所减弱,揭示钙稳态在硒拮抗镉致LMH细胞内质网应激中发挥着关键作用。