【摘 要】
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猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是猪常见多发病,给养猪业造成非常严重的经济损失。目前,疫苗免疫是防控PED的主要措施,但是疫苗免疫存在免疫空白期,高密度养殖
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猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是猪常见多发病,给养猪业造成非常严重的经济损失。目前,疫苗免疫是防控PED的主要措施,但是疫苗免疫存在免疫空白期,高密度养殖带来环境的深度恶化、疫苗免疫失败、抗生素滥用,以及某些猪场存在蓝耳病和圆环病毒病等对疫苗免疫的抑制,传统的PED活病毒(弱毒)疫苗自身存在着传播疾病的风险等因素,对该病的防控带来不利的影响。噬菌体展示技术是将抗体分了展示于噬菌体表面的技术,能够针对特定抗原进行筛选并得到特异性抗体。猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的主要抗原表位均分布在病毒的纤突蛋白(S蛋白,Spike protein)上。利用噬菌体展示技术构建PEDV S蛋白噬菌体抗体库,并从抗体库中筛选和制备PEDV S蛋白特异性单域抗体,相应的单域抗体可用于PED诊断、治疗和预防。本研究中,我们利用PEDV免疫双峰驼,分离外周血淋巴细胞后提取总RNA,通过RT-PCR合成cDNA,再用单域抗体特异性引物进行三次扩增得到VHH基因。将VHH基因片段与pCANTAB5E载体连接,电转化E.coli TG1,成功构建了库容为5.49×106的初级单链抗体库。并将PEDV关键抗原蛋白S克隆到原核表达载体pET-28a中,重组质粒再转化到感受态细胞Transetta-DE3,进行可溶性蛋白表达和纯化。并以S蛋白作为抗原对抗体库进行3轮富集和筛选,Phage-ELISA筛选和获得了 S蛋白特异性单域抗体。
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