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目的:卵母细胞的成熟是保证胚胎正常发育的重要前提,其质量的下降会导致各种女性生殖系统疾病,因此研发促进卵母细胞成熟的相关药物对不孕症的治疗有着重要意义。生发囊泡（germinal vesicle,GV）期是一段卵母细胞发育受抑制的时期,而生发囊泡破裂（germinal vesicle break down,GVBD）期被认为是卵母细胞发育步入成熟的标志,能够决定卵母细胞的质量优劣。钙调蛋白依赖性蛋白激酶II（calmodulin-dependent protein kinase II,Ca MKⅡ）有四个亚型,有研究表明磷酸化Ca MKⅡ对卵母细胞的成熟起到了一定的促进作用,但对于它的各个亚型在该过程中是否发挥了作用还不清楚。蛋白激酶B（Protein Kinase B,PKB/Akt）能够促进卵母细胞进入GVBD的过程,而蛋白激酶Cδ（Protein Kinase Cδ,PKCδ）在该过程中可以作为PKBα/Ak1的上游调节蛋白。在本研究中,我们探讨了Ca MKⅡ的亚型之一Ca MKⅡα在小鼠卵母细胞第一次减数分裂恢复过程中发挥的作用,并进一步讨论了在这一过程中Ca MKⅡα与PKCδ、Akt1可能存在的关系。本实验说明了p Ca MKⅡα（Thr286）对小鼠卵母细胞双线期阻滞释放过程起一定的调控作用,我们分别使用了Ca MKⅡα抑制剂SMP-114和PKCδ抑制剂Sotrastaurin处理卵母细胞并检测了GVBD率,p Ca MKⅡα（Thr286）、p PKCδ（Thr505）和p Akt1（Ser473）的蛋白表达和定位,最后分析了p Ca MKⅡα（Thr286）与p PKCδ（Thr505）和p Akt1（Ser473）可能存在的作用关系,以期为开发促卵母细胞体外成熟的相关药物提供新的思路。研究方法:1、Western blotting和免疫荧光染色法检测GV期和GVBD期卵母细胞中p Ca MKⅡα（Thr286）的蛋白表达和定位。2、在体外培养液中添加不同浓度的p Ca MKⅡα（Thr286）抑制剂SMP-114,观察细胞形态和存活状态并统计生发泡破裂率（GVBD%）。3、Western blotting和免疫荧光染色法检测在合适浓度的SMP-114培养孵育液中,p Ca MKⅡα（Thr286）、p PKCδ（Thr505）和p Akt1（Ser473）的蛋白表达、蛋白定位变化。4、选用不同浓度的PKCδ抑制剂Sotrastaurin处理细胞,比较处理组与对照组卵母细胞p PKCδ（Thr505）、p Ca MKⅡα（Thr286）的表达水平和定位变化。结果:1、Western blotting检测结果显示,小鼠卵母细胞由GV期进入GVBD期后,p Ca MKⅡα（Thr286）表达水平明显增加,免疫荧光染色结果显示p Ca MKⅡα（Thr286）在细胞内的分布发生了改变。2、对照组、25μM SMP-114处理组对小鼠卵母细胞GVBD率无影响,50μM和150μM SMP-114处理组GVBD率均有所降低。3、150μM SMP-114处理细胞后,p Ca MKⅡα（Thr286）的表达显著受到抑制,p PKCδ（Thr505）蛋白表达水平下降,p Ca MKⅡα（Thr286）和p PKCδ（Thr505）的蛋白亚细胞定位较对照组有所偏移;50μM SMP-114处理卵母细胞后,p Akt1（Ser473）蛋白表达水平显著下降,与对照组相比,p Akt1（Ser473）在细胞核的定位明显减少。4、150μM Sotrastaurin处理细胞后,p PKCδ（Thr505）表达水平受到抑制,p Ca MKⅡα（Thr286）表达水平较对照组降低且有统计学意义,免疫荧光染色显示Sotrastaurin处理组的p Ca MKⅡα（Thr286）定位较对照组发生了改变。结论:当用SMP-114或Sotrastaurin处理卵母细胞后,我们统计了卵母细胞的GVBD率并测定了p PKCδ（Thr505）、p Ca MKⅡα（Thr286）和p Akt1（Ser473）的蛋白表达水平,同时在激光共聚焦显微镜下观察并分析了以上蛋白的分布特点。我们的数据显示,适当下调p Ca MKⅡα（Thr286）会使小鼠卵母细胞维持双线期阻滞的状态,并在一定程度上降低了p PKCδ（Thr505）和p Akt1（Ser473）的蛋白表达水平,改变了其相应的细胞内位置分布,同样地,p PKCδ（Thr505）的抑制也改变了p Ca MKⅡα（Thr286）的蛋白表达水平和位置分布。因此我们认为,在卵母细胞生发泡破裂过程中,Ca MKⅡα会对Akt1有一定的影响作用,而Ca MKⅡα和PKCδ可能会相互调控,这为完善Ca MKⅡ家族在调控小鼠卵母细胞成熟过程中的作用关系网提供了新的方向。