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研究背景：乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一,近年来其发病率明显上升,且具有年轻化趋势。随着生物医学的不断发展,人们对乳腺癌的发病机制有了更深层次的认识,并在此基础上建立了多种分子靶向治疗策略。真核翻译起始因子(eukaryotic translation initiation factors, eIFs)是在真核生物细胞中调控蛋白翻译的重要因子,并在人类实体肿瘤的恶性转化、生长、进展和多药耐药等过程中发挥关键作用。在真核翻译起始因子中,eIF4E作为eIF4F复合物关键组成成分,能识别并结合mRNA5’帽式结构,在调控eIF4F复合物起始5’帽式结构mRNA翻译中发挥至关重要的作用。eIF4F复合物由eIF4E、eIF4A和eIF4G共同装配而成,并且该装配过程受到eIF4E结合蛋白(eIF4E binding proteins,4EBP)家族成员的调控。大量研究显示,低磷酸化状态的4EBP能通过竞争性抑制eIF4G与eIF4E的结合阻断eIF4F复合物装配,而过度磷酸化则可使4EBP家族成员丧失封闭eIF4E能力,促进eIF4F复合物装配。4EBP家族成员的磷酸化修饰主要受PI3K-Akt-mTOR信号通路调控,同时mTOR对4EBP的磷酸化效应依赖于mTOR对4EBP的RAIP基序和TOS基序的识别,因此删除RAIP基序和TOS基序能阻断mTOR对4EBP的磷酸化作用,使得eIF4F复合物装配受阻,从而通过下调依赖eIF4F复合物起始翻译的多种下游分子表达发挥抑瘤效应。然而,如何使4EBP能够特异性的进入肿瘤细胞发挥其靶向治疗作用,避免潜在不良反应,更值得我们研究。血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)是被众所周知最重要的血管生成肽[41-44]。血管内皮生长因子A(VEGF-A)刺激血管生成对肿瘤生长和进展是必需的。VEGF-A有两种剪接异构体,其中一种一直被认为能促血管生成。然而,另一种被称为VEGFxxxb异构体,却具有抗血管生成性质。在以前的研究中,我们已经探索了以eIF4E为治疗靶点构建4EBP1D突变真核表达载体治疗小鼠乳腺癌,来达到乳腺癌缓解目标。基因药物靶向作用更值得我们进一步探究。实验目的：系统探讨VEGF111b介导4EBP1D靶向抑制eIF4F复合物对小鼠乳腺癌的生长和血管化的影响,同时比较该策略与非靶向性4EBP1D治疗策略对心、脑、肝、肾和肺等多种重要脏器的毒副作用。进而整体评价两种基因药物联合治疗对乳腺癌治疗效益。并初步探究以下分子机制；1.截短型4EBP1D基因与VEGF111b基因治疗分别诱导乳腺癌减缓增长的分子机制；2.4EBP1D与VEGF联合基因治疗分子靶向机制及可行性分析。实验方法与结果：1)通过细胞培养提取细胞总RNA,运用RT-PCR和分子克隆等技术分别构建VEGF111b和VEGF111b-4EBP1D真核表达载体。通过双酶切及测序鉴定了其正确性。2)建立小鼠4T1乳腺癌实验模型,使用InvivojetPEI介导的体内转染pSecX和pSecX-4EBP1D、pVEGF111b、pVEGF111b-4BP1D评价单种药物治疗效果以及两者联合基因靶向治疗效果。实验证明,尾静脉注射质粒,每三天一疗程,共计五疗程的基因治疗。截短型4EBP1D治疗组和VEGF111b基因治疗组肿瘤体积分别减缓了41.5%和42.8%。而VEGF111b-4EBP1D基因联合治疗组肿瘤体积减缓了57.1%。pSecX对照组肿瘤体积则持续上升。3)分别对实验组和对照各组的肿瘤组织以及心、肝、脾、肺、肾固定、脱水、透明、浸蜡、切片后HE染色,在病理形态学上直接检测肿瘤组织和各器官细胞增殖率。实验结果表明,VEGF111b-4EBP1D联合靶向治疗相比其他治疗组,显示出明显的治疗优势。实验结论：成功克隆了VEGF111b真核表达；并用VEGF111b介导4EBP1D基因联合治疗,相比VEGF111b、4EBP1D单基因药物治疗方案,能够显著缓解小鼠乳腺癌进展,并减少对心、肝、脾、肺、肾组织毒副作用。为使用基因联合靶向药物治疗乳腺癌提供了动物实验依据。