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本文对广州市五山地区朱槿曲叶病和软枝黄蝉曲叶病的发生情况进行了调查,结果表明,朱槿曲叶病的平均病株率为84.5%,软枝黄蝉曲叶病的平均病株率为11.1%。
应用菜豆金色花叶病毒属病毒通用简并引物AV494和DeP3,可以分别从症状表现为曲叶的朱槿病样本和软枝黄蝉病样本中PCR扩增到570bp特异片段,说明朱槿曲叶病和软枝黄蝉曲叶病中存在菜豆金色花叶病毒属病毒。
对广州朱槿曲叶病毒分离物G6的基因组进行了克隆和序列分析,结果表明,该病毒含有DNA-A组分和DNAβ分子,不含DNA-B组分;其DNA-A为单链环状,全长2737nt,推导编码6个ORFs,分别是位于病毒链上的AV1、AV2及位于互补链上的AC1、AC2、AC3和AC4,在AV2与AC1之间的非编码区(IR)中含有一个11nt茎和11nt环的茎环结构及保守序列TAATATTAC。序列比较显示,G6 DNA-A与木尔坦棉花曲叶病毒(CLCuMV)各分离物的同源率均大于89%,其中与CLCuMV-[62]的同源率最高(为96.1%),与拉贾斯坦棉花曲叶病毒(CLCuRV)的同源率为87.1%~89.8%,而与其它菜豆金色花叶病毒属病毒同源率均在87%以下。DNA-A系统进化关系树也显示,G6与CLCuMV各分离物的亲缘关系最近,聚在一起形成一个分支,而与其它双生病毒的亲缘关系相对较远。这些结果说明,侵染广东朱槿的病毒分离物G6应该是CLCuMV的一个分离物。
利用菜豆金色花叶病毒属卫星DNA分子(DNAβ)特异引物β01和β02,从G6中扩增到1个.DNAβ。序列分析结果表明,G6 DNAβ全长1346nt,推导其互补链上编码一个ORF(Cl)。G6 DNAβ与CLCuMV DNAβ和CLCuRV DNAβ同源率分别为92.1%和88.7%,与其它已报道的DNAβ的同源率均在80%以下。系统进化关系分析显示,G6 DNAβ与CLCuMV DNAβ形成一个独立的分支,再与CLCuRV DNAβ及MYVV-Y47 DNAβ形成一个较大分支,而且DNAβ分子与其辅助病毒DNA-A还存在共同进化关系。
对广东软枝黄蝉曲叶病毒分离物G10基因组进行了克隆和序列分析,结果表明,该病毒基因组仅含A组分,未发现B组分及DNAβ分子;其DNA-A也为单链环状,全长2755nt,推导编码6个ORFs,其中病毒链编码AV1(CP)、AV2,互补链上编码AC1、AC2、AC3和AC4,在IR区域中含有一个11nt茎和11nt环的茎环结构及保守序列TAATATT/AC。BLAST结果显示,与G10基因组有较高同源率的均属双生病毒科菜豆金色花叶病毒属病毒;进一步比较发现,G10与已报道的菜豆金色花叶病毒属病毒DNA.A同源率最高仅为81.1%(ToLCGDV-[G2]),其中IR的变异最大(同源率为41.2%~70.7%),而AV1、AV2、AC1、AC2、AC3和AC4基因的同源率分别为72.1~81.8%、73.8~83.8%、74.3~88.1%、70.6~74.4%、69.6~78.3%和71.3~96.0%,它们各自编码的氨基酸序列同源率分别为73.9~86.4%、62.1~84.5%、74.6~88.2%、49.6~63.2%、60.4~69.7%和45.9~83.5%。系统进化关系分析结果也显示,G10与SeYMV-[G46]亲缘关系稍近,并与OYCV、TbLCZV-[ZW]和ToCSV-[SA]形成一个分支,与其它菜豆金色花叶病毒属病毒的亲缘关系均较远。因此,G10应该是双生病毒科菜豆金色花叶病毒属中一个先前未报道的新种,命名为黄蝉曲叶病毒(Allamandaleaf curl virus,AlLCV)。