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抵抗素是由脂肪组织分泌的多肽类激素，与动物胰岛素抵抗、脂肪细胞分化、脂肪代谢及脂肪沉积密切相关。本研究通过大肠杆菌表达重组抵抗素成熟肽，并采用肠激酶消化以及Ni-NTA亲和层析纯化，获得具有生物学活性的重组抵抗素成熟肽(mature resistin peptide，M-resistin)。以小型巴马香猪为试验材料，探讨M-resistin对猪葡萄糖与脂肪代谢的影响。(1)重组mRetn基因大肠杆菌中的表达以pMD-Retn质粒为模板，用PCR方法扩增抵抗素成熟肽基因(mRetn)片段，并与pET-32a(+)表达载体连接，构建表达猪抵抗素成熟肽重组质粒pET-mRetn。以pET-mRetn转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞，用IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测结果表明，重组M-resistin融合蛋白分子量约29 KD。对表达条件如重组菌密度、培养温度、IPTG浓度及诱导时间进行优化并用SDS-PAGE检测。结果表明，在重组菌密度OD600=0.5、培养温度37℃、IPTG浓度1 mmol/L、诱导时间4 h时，可溶性重组M-resistin的表达量最高。(2)重组M-resistin的分离与纯化重组表达菌用含有1 mg/mL溶菌酶的裂解缓冲液悬浮、超声波破碎细胞，上清液用Ni-NTA亲和层析柱纯化，SDS-PAGE凝胶上可检测到分子量为29 KD的单一条带。Western-blot检测结果表明，重组M-resistin融合蛋白可与抵抗素抗体特异性结合。重组M-resistin融合蛋白用肠激酶消化，酶解液经Ni-NTA亲和层析柱纯化，收集含有M-resistin的洗脱液。SDS-PAGE检测结果表明，重组M-resistin分子量约12KD。(3)抗猪M-resistin重组蛋白的多抗血清制备将纯化的重组M-resistin融合蛋白按常规方法免疫SPF级大鼠，第三次免疫后7天采血，用双相琼脂扩散试验测定免疫血清的抗体效价为1:16，末次免疫后7天心脏采血，获得大鼠抗猪M-resistin重组蛋白的多克隆抗血清，抗体与M-resistin融合蛋白和M-resistin蛋白行Western免疫印迹以分析其特异性，结果显示该抗体特异性较高；ELISA法检测其抗体效价，其效价为1:800。(4)重组M-resistin对猪葡萄糖与脂肪代谢的影响随机选取体重相近的雄性巴马香猪6头，每头动物依次接受以下3种处理：0.5 ml生理盐水，低剂量抵抗素(20 ng/mL)、高剂量抵抗素(40 ng/mL)，其间休息5～7天。于给药后0、1、2、3、4、6 h采血，检测相关血液生化指标的变化。结果表明：给予抵抗素后，巴马香猪血清葡萄糖(GLU)和低密度脂蛋白(LDL)水平有升高的趋势；与此同时，血清游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)以及高密度脂蛋白(HDL)均显著降低，脂蛋白脂酶(LPL)活力显著下降；总胆固醇(TC)水平则无影响。上述试验结果为进一步研究抵抗素的生物学功能奠定了基础。