背景与目的：创面愈合是一个复杂的涉及到分子生物学和细胞生物学的过程，通过受损部位的同种或异种细胞的再生而得以修复，最终达到创面封闭的目的。到目前为止，已知有众多的细胞因子参与这一过程，TGF-β是其中最重要的细胞因子之一。它介导了成纤维细胞迁移、增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原、弹性纤维、纤维连接素及细胞外基质（ECM）的合成，在创面的修复和皮肤纤维化过程中起了关键的作用。哺乳类动物中的TGF-β有三种异构体：TGF-β₁、β₂、β₃。TGF-β₃可降低TGF-β₁、β₂的水平，能加速创面愈合及减少瘢痕形成。创面局部使用生长因子，很快会被伤口渗液中蛋白酶降解，需要多次甚至持续给药才能达到一定效果，转基因技术有望可以解决这个问题。本实验采用大鼠深Ⅱ度烫伤模型，构建以重组逆转录病毒为载体含TGF-β₃ cDNA的PLASTN质粒，利用脂质体法导入包装细胞PA317，转染受体成纤维细胞，移植于创面。同时采用EGF及磺胺嘧啶银粉作为治疗药物，观察以上药物对深Ⅱ度烫伤大鼠创面的组织形态学变化，烫伤后1、3、7、14及21天的创面愈合率，创面含水量及其TGF-β₁，TGF-β₂及TGF-β₃蛋白在创面组织的表达情况；评估深Ⅱ度烫伤模型继续作为进一步转基因动物实验研究模型的可行性；探讨TGF-β₃基因转染的成纤维细胞在创面愈合中的影响，为临床应用提供实验依据。材料与方法清洁级成年Wistar大鼠90只，雌雄各半，体重200～250g，随机分为3组，模型对照组（Control，C）、表皮转化生长因子组（EGF）和TGFβ₃转基因成纤维细胞组（TGF-β₃）。脱毛24小时后麻醉大鼠，将皮肤浸泡在80℃水中15s，随后立即在腹腔内注射5ml乳酸林格氏液抗休克，然后分笼饲养。1)C组：在烫伤后1，3，7，14及21d不同时间点将创面描记在半透明纸上，然后创面外用磺胺嘧啶银粉；2)EGF组：处理同对照组外，创面外用20μg／L EGF；3)TGF-β₃组：处理同对照组外，创面用含TGF-β₃转基因成纤维细胞，10⁵个／ml。烫伤后1，3，7，14，21d分别活杀，取烫伤区域全层皮肤，部分固定于4％多聚甲醛固定液中48小时后，常规石蜡包埋，制作2μm厚的连续切片。HE染色观察创面组织变化，用半透明纸法折算创面愈合率，用干湿重法计算创面含水量，SP法观察大鼠烫伤皮肤组织中TGF-β₁、β₂及β₃的表达情况，用图像分析软件测定TGF-β₁、β₂及β₃的平均光密度值。并采用方差分析、相关分析对上述指标进行统计分析。结果①动物情况及创面观察：90只大鼠在处死之前，无一例死亡。烫伤后一两天银粉组创面稍有肿胀，可见少量渗出及创周红肿，EGF组次之，TGF-β₃组最轻。3天以后三组创面均干燥，先后形成干痂，痂下无异常分泌物，未见任何不良反应。②创面愈合率比较：烫伤后7天，愈合率EGF组＞TGF-β₃组＞银粉组。EGF组与银粉组之间的差异有显著性（P＜0.05）；而EGF组与TGF-β₃组以及TGF-β₃组与银粉组之间的差异无显著性（P＞0.05）。烫伤后14天，愈合率TGF-β₃组＞EGF组＞银粉组。TGF-β₃组与EGF组之间的差异有显著性（P＜0.05），与银粉组之间的差异有显著差异性（P＜0.01）；而EGF组与银粉组之间的差异无显著性（P＞0.05）。烫伤后21天，愈合率TGF-β₃组＞EGF组＞银粉组。TGF-β₃组与EGF组之间的差异有显著性（P＜0.05），与银粉组之间的差异有显著差异性（P＜0.01）；而EGF组与银粉组之间的差异有显著性（P＜0.05）。③创面含水量比较：烫伤后1天、3天及7天，3个组的创面含水量差异无显著性（P＞0.05）。烫伤后14天TGF-β₃组与EGF组，EGF组与银粉组之间的差异无显著性（P＞0.05），但与银粉组之间的差异有显著性（P＜0.05）。烫伤后21天TGF-β₃组与EGF组之间的差异有显著性（P＜0.05），与银粉组之间有显著差异性（P＜0.01）；而EGF组与银粉组之间的差异无显著性（P＞0.05）。④病理组织学观察：烫伤1天组织切片可见典型深Ⅱ度烫伤创面，表皮及部分真皮及皮肤附属器明显受损，炎症细胞浸润；烫伤后3、7天，炎症、水肿更加明显，结缔组织开始出现幼稚成纤维细胞增生，EGF组伴有血管再生，TGF-β₃组成纤维细胞增生较银粉组少；烫伤后14天，结缔组织成纤维细胞明显增生，EGF组及TGF-β₃组痂皮下开始有上皮生长；烫伤后21天，组织内仍可见少量炎症细胞浸润，TGF-β₃组大部分创面形成痂下愈合。⑤TGF-β₁在皮肤组织表达结果：烫伤后1、3天三组之间的差异无显著性（P＞0.05）。烫伤后7天，银粉组与TGF-β₃组之间的差异有显著性（P＜0.05），EGF组与TGF-β₃组之间有显著差异性（P＜0.01）；烫伤后14天，银粉组、EGF组与TGF-β₃组之间差异有显著性（P＜0.05）；烫伤后21天，银粉组、EGF组与TGF-β₃组之间有显著差异性（P＜0.01）；烫伤后7天、14天、21天EGF与银粉组之间差异无显著性（P＞0.05）。⑥TGF-β₂在皮肤组织表达结果：烫伤后1天，3天，三个组之间差别无显著性（P＞0.05）；烫伤后7天，14天，银粉组、EGF组与TGF-β₃组之间差异有显著性（P＜0.05），而EGF与银粉组之间差异无显著性（P＞0.05）。烫伤后21天，银粉组、EGF组与TGF-β₃组之间有显著差异性（P＜0.01），而EGF与银粉组之间差异无显著性（P＞0.05）。⑦TGF-β₃在皮肤组织表达结果：烫伤后1天、3天、7天、14天及21天，TGF-β₃组与银粉及EGF组之间均有显著差异性（P＜0.01），而EGF与银粉组之间差异无显著性（P＞0.05）。⑧相关分析结果表明：创面面积愈合率与TGF-β₃的MOD值呈正相关（r=0.348，p＜0.01）；而其与创面含水量（r=-0.524，p＜0.01）、TGF-β₁的MOD值（r=-0.984，p＜0.01）、TGF-β₂的MOD值（r=-0.842，p＜0.01）呈负相关。TGF-β₁的MOD值与TGF-β₂的MOD值成正相关（r=0.662，p＜0.01），与TGF-β₃的MOD值成负相关（r=-0.434，p＜0.01）。结论①本实验制作深大鼠Ⅱ度烫伤模型的方法简便，容易复制成功，且经病理学证实为深Ⅱ度烫伤，重复性好。②本次实验采用创面愈合率作为衡量愈合面积的指标，反映了三个组在不同烫伤时间内的不同愈合情况，并与TGF-β₁、β₂、β₃表达的情况存在相关性：TGF-β₁，β₂与创面愈合率存在负相关性，而TGF-β₃与创面愈合率存在正相关性。③TGF-β₁、β₂及β₃主要表达于成纤维细胞的胞浆及胞膜。以MOD值作为衡量标准，较准确地反映了上述三个指标表达的情况。④TGF-β₁、β₂在TGF-β₃组的表达明显低于银粉组与EGF组，TGF-β₃组的创面愈合率明显高于银粉组与EGF组，说明TGF-β₃转基因转染成纤维细胞可能通过在创面上持续分泌TGF-β₃蛋白，下调TGF-β₁及TGF-β₂的表达，从而在促进创面的愈合的同时，又可减少过度的组织纤维化反应。