目的：胃癌是世界范围内最常见的消化道肿瘤之一，其具有发病率高、死亡率高、早期诊断率低、晚期治疗效果差的特点，2008年全球的胃癌新发病例将近100万，近74万人死于胃癌，严重威胁人类的生命健康[1]，我国是胃癌发病率及死亡率最高的国家之一，目前对于胃癌治疗以手术为主，化疗为辅，但由于大多数胃癌发现时已经处于中晚期，只能行保守治疗，但胃癌对于化疗敏感性低、耐药性高，所以效果不佳，进展期胃癌的5年生存率仍然徘徊在30%～40%左右。随着肿瘤遗传学及分子生物学进一步发展，人们对于胃癌的发病机制有了更深一步的认识，胃癌是一个多步骤、多阶段、多因素参与的疾病，在正常的细胞组织生长过程中，由于上述原因都有可能导致细胞增殖的失调，最终导致胃癌的发生。如果在这个过程中，我们干预某些基因的表达，将会对于胃癌的预后起着积极的作用。近年来，锌指蛋白在肿瘤中的作用受到了广泛的关注。Krüppel家族锌指蛋白是锌指类转录因子中的一类，其能通过调控相关基因的转录和表达，来影响肿瘤的发生与进展。例如：在骨肉瘤的组织中ZNF133呈高表达，可作为骨肉瘤发病过程中特异性的蛋白标志物[2]。ZNF139是锌指蛋白Krüppel家族的成员，有实验证实，ZNF139在胃癌组织高表达，推测其可能参与对胃癌发展演进及胃癌MDR的调控[3]。本实验将以SGC7901细胞建立的胃癌原位移植裸鼠肿瘤为研究对象，观察沉默转录因子ZNF139后对于肿瘤增殖的影响并对其机制进行讨论。方法：1将针对ZNF139的小干扰RNA的质粒以脂质体LipofectamineTM2000为介导，将其按不同浓度转染入体外培养的人胃癌SGC7901细胞中，用qRT-PCR检测其抑制效率。2收集对数期生长的人胃癌SGC7901细胞，配置成细胞悬液后进行裸鼠皮下注射，待皮下瘤体直径为1.5cm时，取胃癌组织块1mm3，接种到下一只裸鼠的皮下，进行鼠间传代，以相同方法传代5次后取出移植瘤，剪成1mm3大小组织块进行胃壁浆膜下原位移植，制备胃癌原位移植裸鼠肿瘤模型。3将针对ZNF139的小干扰RNA的质粒以脂质体LipofectamineTM2000为介导，转染进入裸鼠肿瘤内，同时设置阴性对照组（转染空质粒组，以下简称阴性组）和空白对照组（注射生理盐水组，以下简称空白组），转染作用合适的时间后处死裸鼠，取出瘤体备用。4以机械法将三组不同处理因素的瘤体制备成悬浮细胞，进行原代培养，应用MTT法检测0、24、48、72小时细胞的增殖情况。5转染48小时候，将瘤块以70%酒精固定，用机械法将瘤块制备成悬浮细胞，运用流式细胞术比较三组细胞周期的变化并计算其增殖指数。6应用RT-PCR技术检测ZNF139、PCNA、Cyclin D mRNA在三组中的表达情况结果：1体外实验证实，构建的siRNA-ZNF139能特异性沉默SGC-7901细胞系中ZNF139表达，qRT-PCR检测显示在0μg/μl、0.4μg/μl、0.6μg/μl、0.8μg/μl、1.0μg/μl重组质粒转染后的SGC7901细胞中ZNF139mRNA相对表达量分别为0.992±0.0637，0.662±0.701，0.346±0.0245，0.144±0.216，0.339±0.0658，统计分析显示各组有显著差异(P <0.01)，其中以0.8μg/μl组抑制效率最高，为85.58%。2MTT实验结果显示：于0小时的实验组、阴性组、空白组的OD值分别为0.126±0.031、0.128±0.042、0.125±0.041，于24小时的实验组、阴性组、空白组的OD值分别为0.225±0.063、0.228±0.038、0.221±0.054，于48小时实验组、阴性组、空白组的OD值分别为0.342±0.104、0.495±0.094、0.499±0.127，于72小时的实验组、阴性组、空白组的OD值分别为0.482±0.054、0.665±0.038、0.667±0.038，其中0小时和24小时时，三组无明显差异（P>0.05），而48小时和72小时时，实验组细胞明显低于阴性组和空白组(P<0.05)，阴性组和对照组之间无明显差异（P>0.05）。3流式细胞术结果显示：末次转染注射后48小时，实验组、阴性组、空白组细胞中G0/G1期细胞分别占的百分比为43.80±0.92、36.17±0.35、36.00±0.53，实验组、阴性组、空白组细胞中S期细胞分别占的百分比为30.10±1.97、38.00±0.80、37.90±0.89，实验组、阴性组、空白组细胞中G2/M期细胞分别占的百分比为25.73±0.643、25.37±0.551、26.1±0.65，其中实验组G0/G1期细胞明显多于阴性组和空白组中的G0/G1期细胞，有统计学意义（P<0.05）而阴性组和空白组的G0/G1期细胞无明显差别（P>0.05）；实验组S期细胞明显少于阴性组和空白组中的S期细胞，有统计学意义（P<0.05）而阴性组和空白组的S期细胞无明显差别（P>0.05），3组细胞中G2/M期细胞无明显差别（P>0.05）。实验组增殖指数为36.2%，阴性组增殖指数为63.83%，空白组增殖指数为64%。4ZNF139、PCNA、CyclinD1在三组中表达的情况4.1ZNF139mRNA表达情况：PT-PCR结果显示ZNF139mRNA在实验组、阴性组、空白组中均有表达，其IOD值分别为0.158±0.051、0.359±0.055、0.356±0.038，其中实验组组中表达明显低于阴性对照组和空白对照组（P<0.05），差异有统计学意义。4.2PCNAmRNA表达情况：PT-PCR结果显示PCNA mRNA在实验组、阴性组、空白组中均有表达，其IOD值分别为0.311±0.069、0.650±0.117、0.651±0.127，其中实验组中表达明显低于阴性对照组和空白对照组（P<0.05），差异有统计学意义。4.3CyclinD1mRNA表达情况：PT-PCR结果显示CyclinD1mRNA在实验组、阴性组、、空白组中均有表达，其IOD值分别为0.154±0.042、0.507±0.045、0.508±0.078，其中实验组中表达明显低于阴性对照组和空白对照组（P<0.05），差异有统计学意义。结论：1针对ZNF139的小干扰RNA的质粒，能够有效抑制ZNF13的表达。2人胃癌裸鼠原位移植模型可近似模拟胃癌在人体内的增殖的生物学行为，且操作简单、成瘤率高，可作为目前理想的研究胃癌的实验工具。3将针对ZNF139的小干扰RNA以质粒形式转染入裸鼠后，细胞多滞留在G0/G1期，使胃癌原位移植裸鼠的肿瘤细胞增殖减慢。4ZNF139作为转录水平的基因调控因子，其抑制细胞增殖功能的机制在于通过下调PCNA、CyclinD1等部分增殖相关基因表达，进而影响其细胞周期的进程，肿瘤细胞增殖减慢，发挥其抗肿瘤的作用。