论文部分内容阅读
目的：1.建立OVA致敏和激发的哮喘小鼠模型,观察支气管哮喘急性期、慢性期小鼠和正常小鼠肺组织病理变化；2.观察支气管哮喘急性期、慢性期小鼠与正常小鼠肺组织PPAR-γ的表达以及肺泡灌洗液中细胞分类、IL-13和VEGF水平的变化；3.探讨PPAR-γ在支气管哮喘气道炎症及气道重塑中的作用。方法：4～6周龄、18～22g健康清洁级雌性昆明小鼠30只（由大连医科大学动物实验中心提供），随机分为急性哮喘组（急性组，10只）、慢性哮喘组（慢性组，10只）、正常对照组（对照组，10只），以鸡卵清蛋白（OVA）致敏和激发的方法建立哮喘模型：急性组、慢性组在实验第0、7、14天予20μg OVA＋150μlAL（OH）3＋50μl NS（100mg/L）混悬液腹腔注射致敏；第27、28、29天，给予50μl OVA-NS（2g/L）滴鼻激发；急性组在第30天处死；慢性组在第31～59天每天予2%OVA雾化吸入；对照组予等量生理盐水腹腔注射及雾化吸入，处置时间与B组相同；第60天处死慢性组及对照组。取肺组织病理切片HE染色观察小鼠气道炎症、总气管壁厚度（Wat/pbm）、气管内壁厚度（Wai/pbm）及气道平滑肌厚度（Wam/pbm）；对支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞分类；分别用生物素双抗夹心酶联免疫法测定白细胞介素-13（IL-13）及血管内皮生长因子（VEGF）的水平；采用免疫组织化学法测定过氧化物酶体增殖物激活受体γ（Peroxisome proliferators activatedreceptor-γ PPAR-γ）蛋白的表达。所得实验数据均采用SPSS17.0软件进行分析。结果：1.哮喘小鼠模型成功建立的表现及比较：急性组、慢性组小鼠均出现烦躁不安，呼吸急促，擦鼻，打喷嚏，口唇尾部紫绀，活动频繁，毛发竖起失去光泽，腹肌痉挛，大小便失禁等表现；慢性组表现的尤其显著，更易惊，严重者呼吸节律不齐，俯伏不动，四肢瘫软；对照组未出现上述症状。2.肺组织病理学观察：急性、慢性组小鼠与对照组小鼠对比显示肺脏表面肿胀，体积增大，切面可见渗出白色泡沫,肺组织切片HE染色示支气管管腔狭窄，黏膜水肿，黏液腺增生，黏膜皱襞增多，肺泡膈增厚，水肿形状不规则，肺泡腔融合扩大。急性组哮喘支气管黏膜、黏膜下层、平滑肌及血管周围可见大量炎性细胞浸润，呼吸道黏膜杯状细胞增生明显，胶原沉积明显；慢性组哮喘则在急性期的病理基础上出现气道上皮下纤维化，基底膜增厚且不规则，支气管平滑肌肥厚，新生血管形成，管壁增厚，出现气道重塑。对照组小鼠气管及肺泡结构正常，支气管粘膜上皮完整，未见明显炎症细胞及气道重塑改变。3.气道形态学分析：急、慢性组及对照组小鼠总气管壁厚度（Wat/pbm）为9.64±1.36μm2/μm、15.25±1.43μm2/μm、5.59±1.41μm2/μm，慢性组小鼠Wat/pbm较急性组及对照组明显升高（P<0.01）,差异有统计学意义，急性组小鼠Wat/pbm较对照组明显升高（P<0.01），差异有统计学意义；气管内壁厚度（Wai/pbm）分别为4.68±1.22μm2/μm、9.49±1.19μm2/μm、2.38±0.62μm2/μm，慢性组小鼠Wai/pbm较急性组及对照组明显升高（P<0.01）,差异有统计学意义，急性组小鼠Wai/pbm较对照组明显升高（P<0.01），差异有统计学意义；气道平滑肌厚度（Wam/pbm）厚度分别10.64±1.30μm2/μm、15.67±2.02μm2/μm、5.05±0.85μm2/μm，慢性组小鼠Wam/pbm厚度较急性组及对照组明显升高（P<0.01）,差异有统计学意义，急性组小鼠Wam/pbm厚度较对照组明显升高（P<0.01），差异有统计学意义。4.PPAR-γ水平：急性组小鼠PPAR-γ阳性率为11.23±3.27，慢性组为13.05±0.82，两组肺组织可见大量的PPAR-γ表达，主要位于气道上皮、黏膜下、气道周围和肺泡区的细胞，且PPAR-γ的表达以胞浆为主；对照组小鼠PPAR-γ阳性率为7.63±0.74，在肺组织阳性表达较少。慢性组PPAR-γ水平明显高于急性及对照组（P<0.01），差异有统计学意义；急性组PPAR-γ水平明显高于对照组（P<0.01），差异有统计学意义。5.小鼠支气管肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞所占百分比（EOS%）：急性组小鼠EOS%为13.69±3.37%，慢性组小鼠为23.33±2.03%，对照组小鼠为2.80±0.65%，慢性组EOS%明显高于急性组及对照组（P<0.01），差异有统计学意义；急性组细胞总数和EOS%明显高于对照组（P<0.01），差异有统计学意义。6.支气管肺泡灌洗液IL-13水平：急性组小鼠为77.69±25.55ng/L，慢性组为246.14±15.77ng/L，对照组为32.24±9.61ng/L；慢性组IL-13水平明显高于急性及对照组（P<0.01），差异有统计学意义；急性组IL-13水平明显高于对照组（P<0.01），差异有统计学意义。7.支气管肺泡液VEGF水平：急性组小鼠为40.45±3.76ng/L，慢性组为59.82±16.97ng/L，对照组为27.75±3.78ng/ml。慢性组VEGF水平明显高于急性及对照组（P<0.01），差异有统计学意义；急性组VEGF水平明显高于对照组（P<0.01），差异有统计学意义。8．慢性组：IL-13与VEGF水平呈正相关（r=0.944，P<0.01），差异有统计学意义；PPAR-γ与总气管壁厚度呈正相关（r=0.863，P<0.01），差异有统计学意义。结论：1.哮喘小鼠模型建立成功，急性期、慢性期的病理变化符合哮喘的病理生理改变。2. IL-13、VEGF及EOS在哮喘的发生发展中发挥作用，参与哮喘炎症反应及气道重塑过程，并且IL-13、VEGF及EOS的水平能在一定程度上反应哮喘病情的严重程度。3. PPAR-γ参与哮喘气道慢性炎症及气道重塑的全过程，与哮喘的严重程度有关。4. PPAR-γ在支气管哮喘中的表达与依赖Th2细胞的嗜酸性粒细胞、Th2细胞分泌的炎性因子IL-13及其相关的细胞因子VEGF的水平有关，提示PPAR-γ在哮喘的发生发展中的作用是多靶点的，为PPAR激动剂运用于哮喘的临床治疗提供了实验室理论依据。