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昆虫生长调节剂作为一种杀虫剂,主要通过调节害虫的生长发育过程起到杀虫效果。虫酰肼是一种蜕皮激素类生长调节剂,则是通过控制昆虫的蜕皮过程起到杀虫效果。 本文通过研究虫酰肼对哺乳动物细胞系Hela细胞以及昆虫细胞系Tn581-4细胞的毒性作用,来初步阐明虫酰肼在细胞毒性方面的作用机制。实验中通过MTT法测定了虫酰肼对Hela细胞和Tn581-4细胞的细胞活力具有抑制作用,并且对Tn581-4细胞的抑制作用大于对Hela细胞的抑制作用。通过AnnexinⅤ-FITC/PI染色后的流式细胞术、AO/EB双染的方法,测定虫酰肼能够诱导Hela细胞和Tn581-4细胞发生凋亡,同时通过单细胞凝胶电泳和DAPI染色的方法,测定虫酰肼能够引起细胞的DNA损伤,并且这种损伤与虫酰肼的毒性作用呈浓度依赖性和时间依赖性。 最后根据虫酰肼能诱导细胞凋亡这一结果,检测了引起细胞凋亡的途径。先通过罗丹明123染色检测出虫酰肼引起细胞线粒体膜电位降低,同时通过DCFH-DA染色的结果显示虫酰肼能引起细胞内活性氧自由基含量的增加。蛋白免疫印迹western blot的结果显示细胞质中细胞色素C含量增加,caspase-3活化程度增加。 实验中用抗氧化剂NAC预处理细胞后,检测NAC对虫酰肼细胞毒性的影响,实验结果表明,抗氧化剂NAC能减弱虫酰肼对细胞的毒性作用。根据以上实验结果推测,虫酰肼通过线粒体途径诱导细胞凋亡,而抗氧化剂NAC能够减弱这种毒性作用。