【摘 要】
：
目的构建弓形虫Ⅰ（GT1株）、Ⅱ（ME49株）、Ⅲ型（VEG株）ROP16蛋白过表达慢病毒载体并转染至HL60细胞中,研究ROP16蛋白对其增殖、凋亡、周期、迁移和侵袭的影响并通过JAK-STAT途径探究初步机制及ROP16多态性对HL60细胞作用的差异,以期为临床治疗人急性髓系白血病以及寄生虫分泌蛋白抗肿瘤的研究提供参考。方法1.将构建的慢病毒载体转染至人急性髓系白血病HL60细胞中,荧光显微镜
论文部分内容阅读
目的构建弓形虫Ⅰ（GT1株）、Ⅱ（ME49株）、Ⅲ型（VEG株）ROP16蛋白过表达慢病毒载体并转染至HL60细胞中,研究ROP16蛋白对其增殖、凋亡、周期、迁移和侵袭的影响并通过JAK-STAT途径探究初步机制及ROP16多态性对HL60细胞作用的差异,以期为临床治疗人急性髓系白血病以及寄生虫分泌蛋白抗肿瘤的研究提供参考。方法1.将构建的慢病毒载体转染至人急性髓系白血病HL60细胞中,荧光显微镜下观察各组细胞产生绿色荧光情况;Real time PCR实验和Western-blot实验分别检测细胞中ROP16 mRNA和蛋白的表达水平。2.弓形虫ROP16成功过表达后利用流式细胞术检测细胞凋亡和周期情况,CCK-8实验检测细胞增殖情况;Transwell实验检测细胞迁移能力和侵袭能力,并利用Real time PCR和Western-blot实验检测Bax和Bcl-2基因的表达。3.利用PCR ARRAY实验,筛选与JAK-STAT信号通路相关上调和下调的基因,初步探讨其可能的发生机制,并利用Real time PCR和Western-blot实验进行验证。结果1.成功构建三种不同型ROP16蛋白慢病毒载体,测序结果表明,目的基因序列无误,质粒构建成功后将其转染至HL60细胞中。荧光显微镜下可观察到明显的荧光强度,Real time PCR检测发现,三组过表达ROP16蛋白细胞的ROP16 mRNA表达量显著升高;Western-blot结果显示,三组过表达ROP16蛋白细胞出现明显96KDa大小条带。2.流式细胞术结果显示五组细胞均无明显的凋亡情况,各组间无明显差异;与HL60组相比,HL60-ROP16Ⅰ和HL60-ROP16Ⅲ细胞G2期细胞所占比率显著降低;CCK8实验结果显示各组细胞间吸光度值无明显差异;Transwell实验结果显示,三组过表达rop16基因细胞的迁移和侵袭能力较HL60亲本株和HL60-Venus显著降低,Real time PCR和Western-blot实验结果显示五组细胞Bax、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平无明显差异。3.PCR ARRAY实验结果显示,与HL60相比,三组过表达组细胞均至少有17个以上基因上调,5个基因下调,且有12个基因表达水平具有明显差异性;Real time PCR和Western-blot实验结果显示三组过表达rop16基因细胞STAT3、STAT6、p-STAT3、p-STAT6蛋白表达水平较其他两组明显升高。结论1.成功构建Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型rop16基因过表达慢病毒载体,并获得稳定高表达rop16基因的人急性髓系白血病HL60细胞。2.在体外实验中,弓形虫ROP16蛋白不能通过影响人急性髓系白血病HL60细胞的增殖、凋亡和周期情况而抑制其活性。3.在体外实验中,弓形虫ROP16蛋白可降低人急性髓系白血病HL60细胞的迁移和侵袭能力,以Ⅱ型作用更明显。4.弓形虫ROP16蛋白可能通过调控JAK-STAT信号通路影响HL60细胞的迁移和侵袭能力且3型间部分基因表达水平存在明显差异。
其他文献
目的探讨血清中维生素D水平与儿童系统性红斑狼疮（cSLE）之间的相关性,以及维生素D受体基因多态性（SNP）与cSLE遗传易感性关系。方法收集宁夏医科大学总医院2019年1月至2020年12月在儿科及风湿科住院确诊的36例SLE患儿,随机选取年龄、性别及数量相匹配的对照组,总结SLE患儿病例特点,按维生素D水平分正常组、不足组与缺乏组三个亚组,分析SLE组与对照组亚组之间维生素D水平差异、临床特点
目的分析精神分裂症患者睡眠的潜在类别,明确不同睡眠类别在人口社会学资料、临床变量、负性情绪等方面的表现特征,并分析各潜在类别与精神分裂症复发的相关性,采用质性研究进一步探讨精神分裂症患者的睡眠障碍感受及影响因素,为明确重点干预人群,实施个性化睡眠干预提供理论依据。方法本研究包括量化研究和质性研究两部分。量性研究:本研究是一项横断面研究,采用便利抽样方法选取湖南和宁夏两所精神专科医院符合纳入排除标准
目的对比分析腹膜透析与血液透析两种不同透析方式对终末期糖尿病肾病患者生活质量的影响。方法收集2014年1月1日至2019年1月1日在我院透析中心首次并持续行透析治疗且生存1年以上的糖尿病肾病患者。采用汉密尔顿量表评估患者的精神心理状况,采用ECOG活动指数量表及Karnofsky活动指数量表评价患者的活动能力,采用SF-36量表评估患者的生活质量,采用多元线性回归分析法分析患者生活质量的独立影响因
目的回顾性分析埃克替尼和吉非替尼治疗晚期EGFR突变阳性肺腺癌的疗效和安全性。方法收集2014年1月～2019年9月于宁夏医科大学总医院就诊的一线初治EGFR（外显子19或21）突变晚期肺腺癌患者154例。其中83例患者口服了埃克替尼（125mg3次/日）;71例患者口服了吉非替尼（250mg 1次/日）,直到病情进展或表现出不能耐受的药物毒性。观察患者的ORR、DCR、中位PFS、不良反应。结果
目的分析生活事件与精神分裂症复发的关系,探讨应激理论框架下应对方式和社会支持分别对生活事件与精神分裂症复发关系的调节作用。以横断面调查结果和精神分裂症防治指南（第二版）为构建依据,通过对文献的回顾,制定预防精神分裂症复发的干预计划。方法本研究包括横断面研究和干预方案的构建两部分。横断面研究:采用方便抽样,选取2019年10月至2020年10月的三家精神病医院（包括湖南省第二人民医院、宁夏宁安医院、
目的初步建立宁夏地区正常妊娠妇女孕早期、孕中期、孕晚期总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、天门冬酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转氨酶（ALT）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、尿酸（UA）的参考范围,并分析这七项生化指标与孕期的相关关系,为宁夏地区正常妊娠妇女肝肾功能的参考范围提供依据。方法随机选取2017年1月至2020年6月于宁夏医科大学总医院行常规孕检的健康妊娠妇女3764例为观察组,年龄
目的探讨化脓性脊柱炎与脊柱结核、布氏杆菌性脊柱炎的临床特征差异,分析诊断及鉴别诊断要点。方法回顾性分析2016年1月-2020年12月期间在宁夏医科大学总医院脊柱骨科诊治的143例脊柱感染患者的临床资料,其中化脓性脊柱炎33例,脊柱结核58例,布氏杆菌性脊柱炎52例。对比分析三组患者的临床资料,包括一般情况、临床表现、实验室检查、影像学检查等,分析化脓性脊柱炎细菌学特点。结果化脓性脊柱炎组平均年龄
目的探讨高频通气手术系统在咽喉气管手术（Laryngopharyngeal and tracheal surgery）中应用的有效性及安全性。方法将美国麻醉医师协会分级标准中的Ⅰ～Ⅱ级,拟在全身麻醉下行择期咽喉气管手术的患者60例随机均分为高频喷射通气（High frequency jet ventilation,HFJV）组（H组）和间歇正压通气（Intermittent positive pr
目的分析影响早期胃癌患者淋巴结转移的危险因素及预后的相关因素,为临床医生治疗早期胃癌提供参考依据。方法本研究收集2013年01月01日～2017年12月31日期间就诊于宁夏医科大学总医院的391例经胃癌根治术后被确诊为早期胃癌患者的临床资料,包括性别、年龄、吸烟史、饮酒史、CEA、肿瘤部位、肿瘤大小、病理类型、分化程度、Her-2、Ki-67、P53、VEGF及EGFR表达等。通过随访（门诊复诊、
目的分析垂体腺瘤病理免疫组化中Ki-67标记指数和手术前血清中的内分泌激素水平与垂体腺瘤Knosp分级之间相关性,探讨Ki-67标记指数与术前激素在评估垂体腺瘤侵袭性的诊断价值。方法选择2015年7月至2020年8月行手术治疗的垂体腺瘤患者185例作为研究对象。收集患者人口学资料、术前内分泌激素值、术前垂体核磁共振成像（MRI）检查、术后病理免疫组化结果及Ki-67标记指数,将获取的资料通过Spe