菌株HD-010抗辣椒根腐病菌活性产物发酵条件的研究

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菌株HD-010为微生物学黑龙江省高校重点实验室从黑龙江地区土壤中自行分离得到的一株对辣椒根腐病菌拮抗性较好的链霉菌( Streptomyces sp.)。是一株极具开发潜力的生防菌株。本研究旨在通过单因子试验和响应面优化法对链霉菌菌株HD-010的摇瓶发酵条件进行优化,以进一步提高其代谢活性物质的含量,并为进一步的应用研究奠定基础。本试验首先测定了几种发酵培养基对HD-010菌株活性产物的影响。确定最好的发酵培养基配方为:葡萄糖20g/L,蔗糖25 g/L,黄豆粉50g/L,NaCl 4g/L,CaCO3 3g/L,K2HPO40.2g/L,pH7.0,2%接种量,装液量为30mL/250 mL三角瓶,摇瓶转速为180r/min,发酵温度为28℃,发酵5d。通过单因子试验方法,确定了葡萄糖作碳源,玉米粉作氮源,加入Ca2+和Na+有利于菌株HD-010产生抗菌活性物质。根据单因素的初步试验结果,采用Plackett-Burman试验设计对培养基成分及培养条件进行筛选,得到4个显著因素,分别为葡萄糖、蔗糖、玉米粉和接种量。对前3个因素进行下一步的中心组合试验,对菌株HD-010发酵培养条件进行优化,建立了摇瓶发酵培养基配方筛选模型: Y=55.20-1.59A-1.77B+7.89C+0.68AB-2.72AC-4.82BC+1.05A2-0.96B2-5.68C2(A、B、C分别为葡萄糖、蔗糖、玉米粉,Y为响应值即抗菌活性物质的效价值。)根据此方程由Design-Expert 7.1.3软件设计确定最优发酵培养基和条件为:葡萄糖10g/L,蔗糖10.2g/L,玉米粉25.8g/L,氯化钠1g/L,碳酸钙1g/L,pH8.0,6%接种量,装液量为30mL/250 mL三角瓶,摇瓶转速为250r/min,发酵温度为28℃,发酵5d。其理论预测值为66.22AU/mL。通过验证试验结果表明:菌株HD-010产生的抗菌活性物质实际效价的平均值为71.38AU/mL,与预测值66.22AU/mL较接近,预测精度达到了92.78%,这表明试验值和实际值间有较好的拟合性,优化模型可靠。采用此优化配方菌株HD-010最终效价比原始发酵培养基发酵所得到的效价提高了55.28%。
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