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目的 研究人肺腺癌A549/DDP耐药细胞端粒酶活性与耐药之间的关系,通过抑制端粒酶活性,观察端粒酶催化亚基脱氧核酶对人肺腺癌A549/DDP耐药细胞生长的作用,探讨端粒酶作为耐药肿瘤细胞治疗新靶标的可能性。 方法 ①体外培养人肺腺癌A549/DDP耐药细胞,提取细胞总RNA,反转录获得cDNA,PCR扩增MRP,凝胶电泳分析。Western blot检测A549/DDP细胞bcl-2蛋白表达。②体外培养人肺腺癌A549/DDP耐药细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR扩增端粒酶RNA组分、催化亚基mRNA组分,改良KIM法,测定细胞端粒酶活性(TRAP)。③将体外培养人肺腺癌A549/DDP耐药细胞分为5组:正常对照组、顺铂组、脂质体对照组、脂质体+脱氧核酶组、顺铂+脂质体+脱氧核酶组。顺铂、脂质体、脱氧核酶浓度分别为3ug/ml、1ug/ul和0.25umol/L,作用72小时后,TRAP测定细胞端粒酶活性,MTT法测定细胞活性,观察脱氧核酶和顺铂对A549/DDP细胞生长的作用。 结果 ①A549/DDP耐药细胞出现约427bp的特异性扩增片断,有MRP表达,Western blot分析有bcl-2蛋白表达。②A549/DDP耐药细胞出现约150bp和198bp的特异性扩增片断,有端粒酶RNA组分和催化亚基mRNA的表达;A549/DDP耐药细胞端粒酶活性阳性。③在4-500nmol/L浓度范围内,经脱氧核酶作用的A549/DDP耐药细胞的端粒酶活性明显弱于未经脱氧核酶作用的A549/DDP耐药细胞,表明针对端粒酶催化亚基的脱氧核酶在细胞内具有抑制A549心DP耐药细胞端粒酶活性的作用。④0.25ulnoFL脱氧核酶作用72小时后,可明显抑制A549心DP耐药细胞的生长,生长曲线表明,A549/DDP耐药细胞OD值明显低于对照组,P<0.01。⑤端粒酶脱氧核酶对A549刃DP耐药细胞具有明显的抑制作用,在O.25ulnol几的浓度下作用72小时,对A549/DDP耐药细胞生长的抑制率可达32.9%,与顺铂联合使用时抑制率可达60.5%,顺铂和端粒酶催化亚基脱氧核酶联合用药具有协同作用。 结论①人肺腺癌A549/DDP耐药细胞同时有M即、bd一2及端粒酶催化亚基mRNA、RNA组分表达,提示该细胞耐药机理除了与MRP有关的多药耐药外,还存在与bcl一2有关的抗凋亡作用,而端粒酶可能通过抑制细胞凋亡参与肿瘤细胞耐药。②人肺腺癌A549/DDP耐药细胞端粒酶活性阳性,是端粒酶抑制剂作用于该细胞的基础。③端粒酶催化亚基脱氧核酶可显著抑制人肺腺癌A549/DDP耐药细胞的生长,并且与化疗药物顺铂有协同作用,提示端粒酶有可能成为耐药肿瘤细胞新的治疗靶标。