前言多胺(Polyamines,PA)是一种含有多个氨基的长链脂肪族化合物,包括腐胺(Putrescine)、精脒(Spermidine)和精胺(Spermine)。多胺广泛存在于组织和体液中,其功能与细胞生长发育有密切关系。自1971年以来,多胺作为临床肿瘤诊断指标的可能性引起广泛的兴趣,大量研究证明,临床多种癌症患者体液及尿液中多胺浓度均增加。本文目的在使用一种可行、有效、准确度高的分析方法测定正常人尿液中多胺,并尝试初步确定多胺的正常值范围,并尝试以该正常值为肿瘤诊断指标应用于若干实际病例,探讨其作为诊断试验的评价指标。对象与方法一、对象健康人群(22例),来自中国医科大学查体的健康学生。肿瘤人群(30例),来自中国医科大学附属第一临床医院肿瘤科。上述人群近期(1个月)无感染、外伤、癫痫等症状和体征。二、方法(一)样品的采集:受检者采样前禁食4～8小时,并禁止剧烈活动,取空腹晨尿,冷冻于-40℃冰箱中。(二)仪器条件1、色谱条件Rtx-5MS毛细管柱(Restek公司)(30m×0.25mm×0.25μm);He载气(＞99.999%);进样口温度280℃;初始柱温70℃(保持1min),以25℃/min的升温速率升至295℃(保持10min)。不分流进样;接口温度280℃。2、质谱条件EI源,温度为200℃,扫描方式SCAN模式。(三)分析步骤取尿样1ml,加入内标2μl,向试管中加入0.1ml浓HCl,100℃-105℃之间加热1.5小时,调碱性至12.75,进行固相萃取,然后用衍生化试剂洗脱,氮气浓缩至30μl,供下一步GC/MS仪器测定。所得的多胺值用紫外可见分光光度计所测得的尿肌酐值进行校正。实验结果GC/MS是一种灵敏、快速的检测技术,实验所得结果经Microsoft Excel统计软件和SPSS统计分析软件分析,得精胺的正常值范围(X±S,nmol/mg肌酐)为22.964±3.316。比较正常人群与肿瘤患者的Spm水平,发现肿瘤患者与正常人群尿多胺值具有统计学意义。运用所的精胺值范围实验性地验证肿瘤的特异度为81.8%;误诊率为18.2%。讨论腐胺在浓盐酸为0.5ml时呈现较大值,而精脒、精胺受浓盐酸体积的影响甚微。100℃～105℃、0.1ml浓盐酸水解效果较好。硅藻土的粒度为15-25目最为适合。腐胺、精脒、精胺中存在氨基,酰化能降低氨基的极性,提高检测的灵敏度。衍生物的稳定性很低,多胺衍生物在乙酸丁酯介质中于4℃下24小时内呈现稳定状态。此前报道尿多胺欠稳定,并受肾脏清除率的影响,不如血样作为检材更稳定。在神经系统肿瘤病人中,血、脑脊液多胺浓度均增高。若能在该研究中同时检测血液及脑脊液中多胺水平将更有意义。诊断指标的评价:运用精胺正常值检测肿瘤的特异度为81.8%,误诊率为18.2%。由于多胺检测的例数较少,该实验结果仍需更多的数据修正。检测时间:检测的全过程包括检材的提取、水解过柱、浓缩进样、GC/MS分析、数据计算、出具报告。共需3小时。经济学评价:取检材材料费(尿杯、试管、吸管、小柱)、检测试剂(衍生化试剂、内标、浓盐酸、氢氧化钠、固相萃取材料(硅藻土)的费用和仪器的消耗费(pH计、GC/MS、载气、加热器、注射器、微量加样器),共计八十元左右。结论尿与其它生物检材相比,易取得、易保存,且含有大量的生物学信息。质谱仪是一种很好的定性鉴定用仪器,色谱仪是一种很好的分离用仪器,本论文结合上述条件,测得部分人群的精胺的范围(X±S,nmol/mg肌酐)为22.964±3.316,远低于肿瘤病例精胺值,且以该值作为验证肿瘤的特异度为81.8%。