药食两用鳞尾木种质资源遗传多样性及开发利用研究

来源 :桂林医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:songyonghuan
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目的:从鳞尾木种质资源遗传多样性、营养成分、总黄酮含量及抗氧化活性、光合特性等方面进行研究,以期为鳞尾木的可持续开发利用提供研究基础。方法:(1)采用正交和单因素试验设计方法,对影响鳞尾木ISSR-PCR反应体系的d NTPs、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA及Mg2+浓度5个因素进行优化,建立出稳定、重复性好的鳞尾木ISSR-PCR扩增体系,筛选出所有有效引物后对所有DNA分子样进行扩增,读取谱带后用相关软件分析鳞尾木的遗传多样性。(2)在单因素试验基础上应用响应面分析法对鳞尾木叶总黄酮的提取工艺进行优化,并研究其粗提液体外抗氧化活性,另对广西五个产地内鳞尾木总黄酮含量进行测定比较。(3)依据各营养成分测定的国家标准,对鳞尾木茎、叶、果三个部位的主要活性物质、氨基酸及矿物质元素含量进行测定。(4)以两年生鳞尾木扦插苗为试验材料,设置10%、30%、50%与100%的光照梯度,研究不同光强对其生长与光合特性的影响。结果:(1)适合鳞尾木ISSR-PCR的反应条件为:在20μL的反应体系中,d NTPs浓度为0.4 mmol/L、Taq DNA聚合酶用量为1.5 U、引物浓度为0.8μmol/L、Mg2+浓度为2.0 mmol/L、模板DNA浓度为45 ng。扩增程序为:在94℃条件下预变性5 min;94℃条件下变性30 s,52.9℃条件下退火30 s,72℃条件下延伸30 s,以上3个步骤循环40次,最后72℃延伸10 min;鳞尾木五个自然居群每条引物扩增得到的位点数在3~7之间,分子量大小在100~1500bp内,其中多态性谱带数为45条,多态性位点百分率(PPL)为100%,Shannon信息多样性指数(I)为0.3581,有效等位基因数(Ne)为1.6118,Nei’s基因多样性指数(H)为0.5348。在总的遗传变异中,16.51%发生在居群间,83.49%发生在居群内,基因流Nm=3.6790。五个居群并不是按照地理位置进行分支,内斗、龙虎山、弄岗、玉良四个居群先汇成一类,最后和田林汇聚,田林居群的遗传距离最大,此外鳞尾木居群间的遗传距离和地理距离之间的相关性并不显著(r=0.5475,P=0.0680>0.05)。(2)采用超声波辅助提取鳞尾木叶片醇溶液中总黄酮,其最佳提取条件为超声波功率330 W,超声频率35KHz,乙醇浓度80%,料液比1:41.8 g/m L,提取温度64.6℃,提取时间50.7min,此条件下总黄酮得率为2.83%。此外鳞尾木叶粗提液对·OH、O2-·、DPPH·均能够起到清除作用,当黄酮浓度为1 mg/m L时,对·OH、O2-·和DPPH·的最大清除率分别为13.27%、30.98%、38.68%,具有较好的还原能力,玉良产地的鳞尾木总黄酮含量及抗氧化活性优于弄岗、龙虎山、内斗和田林产地。(3)从氨基酸总量上看,嫩叶>果>茎(P<0.05),鳞尾木嫩叶中氨基酸总量为5.83 g/100 g,约为香椿芽、茴香和茼蒿氨基酸总含量的3.89倍、2.69倍和3.33倍。除天门冬氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、精氨酸外,其他氨基酸含量均表现为叶显著高于其他两个部位,在三个部位里谷氨酸含量最高,其次是天门冬氨酸,蛋氨酸最少。其嫩叶粗纤维、粗脂肪、维生素C等含量显著高于常见蔬菜,并且具有显著高钾低钠的特征,钾含量约是钠含量的4倍左右。(4)一定程度的遮荫更有利于鳞尾木幼苗的生长,50%光照条件下鳞尾木的株高、地径及冠幅的增长量均显著高于10%、30%和100%的光照水平(P<0.05);不同光强对鳞尾木的光合特性影响明显,50%光照有利于提高鳞尾木的气孔导度和蒸腾速率。结论:(1)鳞尾木遗传多样性具有较高的水平,在总的遗传变异中,16.51%发生在居群间,83.49%发生在居群内。遗传多样性最高的是百色田林居群,该居群具有很高的遗传变异,建议将该居群作为重点保护单元。鳞尾木居群之间的基因流动较强,不易发生遗传分化。(2)鳞尾木叶总黄酮含量并不高,其中隆安玉良的鳞尾木总黄酮含量及抗氧化活性要优于其他四个产地。(3)鳞尾木茎、叶、果中营养成分含量不尽一致,其中以嫩叶中营养价值最高,更具鲜味,并且具有显著的高钾低钠特征。(4)50%遮荫率是鳞尾木幼苗生长的适宜条件,强光或者弱光会对其形成光抑制或弱光胁迫,影响其生长。
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