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组织工程的关键是细胞在体外基质上的大规模培养,微载体悬浮培养法是最有潜力的培养方法之一。以生物降解高分子为原料制备的微载体,因其可生物降解的特性可省去细胞与基质的分离步骤,避免了细胞损失,同时细胞和生物降解微载体的复合物可直接植入体内,因而生物降解高分子微载体是一种很有潜力的微载体。但是生物降解高分子链的疏水性和缺乏生物活性等不足影响了细胞在微载体表面的吸附和生长。本课题从高分子链的设计和合成出发,通过改变高分子链的组成和端基功能团、以及微载体的制备条件,来调控微载体的表面性质和形态,并通过细胞培养实验来阐明高分子微载体的表面性质与细胞生长之间的关系。
本论文工作合成了亲水链段端基连有功能基团、具有PCLm-b-PEOn-FG结构的两亲性嵌段共聚物,其中PCL为疏水的聚(ε-己内酯),PEO为亲水的聚环氧乙烷,m和n分别为PCL及PEO链段的重复单元数,FG为氨基(NH2)、羧基(COOH)、甲氧基(OCH3)、甘氨酰-精氨酰-甘氨酰-天冬酰-酪氨酸((GRGDY)等功能基团。凝胶渗透色谱(GPC)及核磁共振(1H NMR)的表征结果证实采用本文作者的聚合方法所合成的共聚物具有组成及分子量可控、分子量分布较窄等特点。
以PCLm-b-PEOn-FG为基质,采用双乳液溶剂挥发法制备了微球。通过改变共聚物的组成、端基功能基团以及微球的制备条件,实现了微球表面性能(包括形貌和表面官能团等)的调控。研究发现随着PEO组成的增加,微球的表面形貌从平滑表面向微孔、多孔、毛簇的粗糙表面结构转变。利用荧光探针确定了功能基团主要分布在微球的表面和外层上。以PCLm-b-PEOn-GRGDY作为基质可制备表面有生物活性分子的微球。因此,从分子链结构的调控出发来制备不同表面性能的微球的方法具有简便和可控度高的特点,为微球的表面改性和生物活性化提供了一种新的思路。
研究了高分子微球在降解过程中表面形态的变化,发现聚己内酯均聚物微球降解后在微球表面形成尺寸分布不匀的结构,而两亲性共聚物微球表面则形成尺寸分布较均匀的孔洞结构。讨论了共聚物的亲水/疏水组成、端基官能团结构对微球降解行为的影响。
采用四唑盐比色法(MTT)对以PCLm-b-PEOn-FG为基质制备的微球进行了细胞毒性评价,结果表明这些微球的细胞毒性为一级或零级,细胞毒性较低,符合进一步细胞实验的要求。
以PCLm-b-PEOn-FG为基质制备的不同性能的微球作为微载体进行了鼠成纤维细胞L929的培养,发现以端基为多肽的两亲性嵌段共聚物制备的微球,细胞在其表面的黏附密度和铺展比例都高于其它端基官能团共聚物制备的微球。以两亲性嵌段共聚物制备的微球在培养过程中,细胞在其上的黏附密度均高于以PCL均聚物制备的微球。此外,在一定范围内,微球的尺寸越小,表面黏附的细胞密度越高。讨论了高分子的链结构和微球的表面性质对细胞生理行为的影响。