BMSCs作为组织工程的种子细胞具有较多优势，BMSCs是成体干细胞，来自患者自身，取材方便，有多向分化潜能，而干细胞替代病态的肝细胞已成为肝脏导向的细胞治疗的主要目标，对干细胞分化向肝细胞进行深入的研究，有望给肝病治疗带来新的飞跃。 目的：⑴. 建立犬BMSCs体外培养体系，观察BMSCs的形态、生长特性及表面抗原的表达情况。⑵. 探讨HGF、EGF对骨髓间充质干细胞向肝细胞方向的诱导分化作用，探索出适当的诱导条件，为进一步深入研究和临床应用提供基础。 材料和方法：⑴. BMSCs的分离培养和生物学特性分析：采用全血贴壁法对BMSCs进行分离培养，观察BMSCs的形态及生长特性。培养至第2代进行检测：细胞活力分析，流式细胞技术检测细胞表面抗原表达情况，MTT法绘制细胞生长曲线。⑵. BMSCs体外诱导分化为肝细胞及相关标志物检测：细胞培养至第3代，依据培养液中所加生长因子不同分为四组：无生长因子组、EGF组、HGF组和HGF+EGF组，相应标记为A、B、C、D四组，并于诱导后7d、14d、21d留取细胞，免疫组化检测AFP、CK-18表达情况，免疫荧光检测ALB表达，PAS反应检测糖原，RT-PCR分析ALB mRNA表达情况。⑶. 流式细胞技术分析诱导细胞的分化率并对结果进行统计学分析。 结果：⑴. 细胞培养：接种7d后在倒置相差显微镜下观察见原代BMSCs呈集落样生长，传代后细胞散在分布，大小形态均一性好，细胞增殖旺盛。至第2代台盼蓝染色细胞活力可达98％左右。分离的细胞表面CD标记为：CD13－、CD34－、CD45－、CD29＋，均一性可达90％以上。MTT法绘制生长曲线可见第2代BMSCs有很强的增殖能力。⑵. 生物化学检测：C、D组诱导培养细胞均可检测到肝系细胞的标志，细胞诱导至7d时出现AFP表达，14d时表达增高，21d时表达下降；7d时可有少数细胞表达CK-18，14d时ALB和糖原出现表达，且CK-18、ALB和糖原随着时间延长表达量逐渐增高；3周时RT-PCR也可检测到ALB mRNA的表达；A、B组细胞没有检测到肝系细胞标志。⑶. 统计学分析：21d时荧光标记诱导细胞ALB后流式细胞仪检测细胞分化率，对各组诱导率进行单因素方差分析，结果表明：D组诱导率明显高于C组（P<0.05）。 结论：⑴. 采用全血贴壁培养法分离培养的骨髓间充质干细胞增殖力旺盛，而且具有较高的活力和纯度。⑵. HGF和EGF体外可以诱导BMSCs定向肝细胞样细胞分化，而且二者有协同作用。⑶. 单独EGF无诱导BMSCs定向肝细胞分化的能力。