目的：本课题通过建立腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)诱导的糖尿病Sprague Dawley(SD)大鼠模型，应用活性维生素D3干预糖尿病大鼠，采用免疫组织化学、反转录PCR、光镜等方法检测SD大鼠肾组织，观察活性维生素D3对其足细胞nephrin、podocin及WT1表达的影响，探讨活性维生素D3是否可以改善糖尿病大鼠足细胞的滤过功能，从而减少蛋白尿、延缓肾脏病的进展，为糖尿病肾病的早期防治，提供实验性理论依据。Nephrin是足细胞上第一个被发现的跨膜蛋白，属于免疫球蛋白超家族成员，特异表达在足细胞上，nephrin可诱导Akt途径使数种靶蛋白磷酸化，保护及减少足细胞凋亡。Podocin通过CD-2AP连接于Nephrin形成复合体，呈发夹样结构插入细胞膜内，其对Nephrin信号传导有增强作用。他们表达异常可影响肾小球滤过屏障通透性，导致蛋白尿的产生。故两者对维持肾小球滤过屏障及足细胞功能和结构完整性发挥着极其重要的作用。肾母细胞瘤抑制基因(WT1)对多种基因表达具有调节作用，是足细胞的特异标志之一，对维持足细胞的正常结构及功能有重要作用。方法：选择清洁级SD(雄性)大鼠36只，体重200±20g，适应性喂养3天,随机选取24只大鼠给予链脲佐菌素腹腔注射制备糖尿病模型，其余12只做正常对照组（NC组）。将造模成功的大鼠按随机区组原则分为:糖尿病对照组（DN组）、活性维生素D3治疗组（DT组）,每组各12只。DT组在糖尿病模型建立之后予骨化三醇0.03ug/(kg·d)灌胃；NC及DN组以等量的花生油灌胃。分别于模型成功后8、12周测定各组大鼠血钙、血磷、血肌酐、血尿素氮以及24小时蛋白尿，并收集肾组织标本。用苏木素伊红（HE）在光镜下观察大鼠肾组织病理变化；采用免疫组织化学方法及RT-PCR检测肾脏nephrin、podocin及WT1的表达。所得实验数据用均数±标准差(x±S)表示，各组间比较采用单因素方差分析（满足正态性和方差齐性），两组间的比较采用两独立样本t检验（不满足正态性和方差齐性的数据资料采用非参数检验），实验数据应用SPSS13.0统计分析软件处理，以P<0.05认为有统计学意义。结果：1一般情况DN组、DT组大鼠注射STZ后2～4天即出现多饮、多食、多尿，逐渐消瘦，活动减少，而NC组则无上述情况出现。2生化检测结果各组大鼠24小时尿蛋白定量、血钙、血磷、血肌酐及尿素氮的比较。8及12周末DN组大鼠尿蛋白定量、血肌酐与NC组比较，DN组升高明显（P＜0.05），DT组比DN组低（P＜0.05）。血钙8周时DN较NC组降低，12周时降低更明显；DT组在8周时与DN组比较差别不大，12周时血钙水平较DN组高，但低于NC组。血磷水平同期各组间比较无差别（P>0.05）。3组织化学变化苏木精--伊红染色（HE）结果光镜HE染色显示,整个实验过程中NC组大鼠的肾脏组织均未见明显病理学改变。与同期的NC组相比,12周末,DN组肾小球体积增大，肾小球系膜区增宽,系膜细胞增多。肾间质、肾小管无明显病理形态学改变。同期DT组肾小球病变不明显。4免疫组织化学结果8周和12周末DN组、DT组与NC组比较大鼠肾组织中nephrin、podocin及WT1的表达减少，其中12周末降低更为显著（P＜0.05）；8周和12周末DT组较DN组各因子表达升高，但低于同期NC组(P <0.05)。5Reverse Transcription-PCR (RT-PCR)结果与NC组大鼠相比，糖尿病大鼠肾组织中nephrin、podocin及WT1表达降低，12周末变化更显著（P＜0.05）；8周和12周末DT组较DN组各因子表达升高，但低于同期NC组(P <0.05)。结论:1糖尿病大鼠肾组织nephrin、podocin及WT1表达下降，与蛋白尿水平呈负相关，提示nephrin、podocin及WT1在糖尿病肾损伤的发生发展过程中发挥一定作用。2活性维生素D3能够明显减轻糖尿病大鼠蛋白尿的产生及肾脏病理形态学改变，其机制可能与上调nephrin、podocin及WT1蛋白的表达。早期应用活性维生素D3可改善糖尿病肾病大鼠肾小球滤过屏障功能，对延缓糖尿病肾病的发生与发展，具有一定的保护作用。