四物汤是中华医药传统名方，近年来的研究发现四物汤能促进鼠骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells，MSCs)的体外增殖，在特定条件下，还能诱导MSCs向神经细胞、成骨细胞以及造血细胞等分化。但四物汤中对MSCs体外增殖起促进作用的化学成分至今尚未有深入报道，本文采用各种分离和鉴定方法对其进行研究。本研究首先采用石油醚、乙酸乙酯、氯仿和二次蒸馏水分别提取四物汤药剂，得到不同极性部分的溶剂提取物。用四甲基偶氮唑盐(MTT)法研究不同提取物的干细胞活性，结果表明四物汤乙酸乙酯提取部分(A-2)具有促进MSCs增殖的活性。因此，主要对A-2部分进行进一步分离、成分分析和活性实验。成分分析方面采用单个物质化学成分分析和生物指纹图谱结合的方式，利用现代化分析检测技术如气相色谱—质谱联用、高效液相色谱、高效液相色谱—多级质谱联用等进行分析鉴定。生物活性方面采取了MTT方法和流式细胞技术相结合的手段相互印证。GC-MS检测到四物汤乙酸乙酯提取部位(A-2)部位42种挥发性成分。采用硅胶柱层析的方式对A-2作梯度洗脱，进一步分段分离得到20个组分，记为F-1～F-20。经HPLC以及红外光谱、质谱等结构检测发现组分F-4为藁本内酯。经由流式细胞方法显示其具有最强促进MSCs体外增殖的活性。同时在用HPLC-MS~n进行研究时发现组分F-11中含量达84.47％的化学成分6，7-二羟基-烯丙基苯酞为首次鉴定得到。MTT方法结果表明组分F-11活性仅次于F-4。HPLC的定性与定量实验显示，组分F-7和F-10有较大含量的脂肪酸酯类化合物。流式细胞技术确定四个酯类标准品含量对生物活性的影响，结果显示浓度为90μg／mL时，十六酸甲酯(S-1)和十八酸乙酯(S-4)的增殖指数(PI)均比对照组大，表明具有促进MSCs体外增殖作用，而相反十六酸乙酯(S-2)和十八酸甲酯(S-3)增殖指数(PI)均比对照组小，表明具有抑制MSCs体外增殖作用。其中在对组分F-7鉴定中检出含有S-1(3.04％)，S-2(3.92％)，S-4(9.61％)，而组分F-10中检出S-1(14.46％)，S-2(17.47％)，S-3(3.19％)，S-4(1.03％)。生物活性显示F-7活性比F-10活性强，初步推测在酯类混合物中，对MSCs起促进作用主要为S-1和S-4。在对标准品不同浓度的实验中显示浓度为0.15μg／μL时S-1和S-4能促进MSCs增殖，且S-4的增殖活性在四个酯类标准品中最强，而高浓度时(1.5μg／μL)四个标准品的O．D．值均低于对照组，不能促进MSCs增殖。由于中药复方存在多靶点、多成分协同作用，本研究进一步对生物活性指纹图谱进行对比分析。20个组分的GC-MS色谱图总离子流的保留时间和峰面积，得到四物汤乙酸乙酯提取部位中具有促进MSCs增殖作用的生物指纹图谱。初步结果显示，四物汤乙酸乙酯提取部位具有促进MSCs增殖作用的成分是藁本内酯、十六酸甲酯、十八酸乙酯。而促进干细胞增殖的不是单一的物质，它是多分子协同作用的结果。相同浓度下，既有促进增殖作用的物质，也有起抑制作用的物质，这为四物汤促进MSCs增殖而又不引起MSCs过度增长的分子机制提供了实验依据。