为了研究鸡贫血病毒（Chicken anemia virus，CAV）VPI蛋白的抗原表位，本研究根据生物软件Lasergene对VP1蛋白抗原性的分析结果，将VP1蛋白进行了分段表达，选取缺失VP1 N端68个氨基酸的融合表达产物VP1-A进行纯化，免疫BALB/c鼠，制备了6株抗VP1蛋白的单克隆抗体（MAb）。以这些MAbs对分段表达的VP1蛋白进行Western blot分析，在VP1蛋白上初步鉴定出3个抗原位点，分别位于VP1的219-274氨基酸（aa）残基、324-369aa和275-302aa残基内。为了更详细而全面地了解VP1蛋白的抗原结构，构建了vp1基因特异性噬菌体展示肽库，利用多克隆抗体对肽库进行3轮淘选，得到9个阳性噬菌体。序列分析表明，有5个克隆展示有相同的序列“T³⁰⁹YMSFATLTALGAQWSFPPGQRSVSRRSFNHHKARG³⁴⁴”，有4个克隆展示有相同的序列“M¹⁹⁶FGGWHLFRHIETRFQLLA²¹⁴”。利用制备的6株MAbs与这些阳性噬菌体进行Western blot分析，结果表明2F3等4株MAbs与噬菌体P12反应。为了对这4株MAbs及MAb 4D5对应的表位精确定位，人工合成一系列成对的寡核苷酸，退火后插入pET32a载体中进行融合表达。利用MAbs对融合蛋白进行Western blot反应性扫描，鉴定出2F3等4株MAbs对应的表位位于D²⁴⁵HQNRWRKG²⁵³。利用同样的方法鉴定出MAb 4D5对应的表位位于W³⁵³HTLVPLGTE³⁶²。根据生物软件Lasergene对VP2蛋白的分析发现该蛋白具有良好的抗原性，为了对其进行表位作图（epitope mapping），首先在E．coli中克隆、表达了VP2蛋白全长，纯化后免疫BALB/c鼠，制备了7株抗VP2蛋白的单克隆抗体。人工合成一套彼此重叠6个氨基酸长度为16个氨基酸并覆盖VP2全长的短肽，融合表达后与MAbs进行Western blot和ELISA反应性扫描，鉴定出3个抗原表位，分别为G²¹QPGPSGAAQGQVISN³⁶，L¹¹¹EDRSTQASLEEAILR¹²⁶和E¹²¹EAILRPLRVQGKRAK¹³⁶，而G¹⁶AAQ²⁰，Q¹¹⁷ASL¹²⁰和P¹²⁷LRV¹³⁰分别为各表位的的主要功能区。用这3个纯化后的融合短肽免疫BALB/c鼠，结果表明这些融合蛋白均能诱导小鼠产生VP2蛋白的特异性抗体。为了研究vp3基因对病毒复制及致病力的影响，构建了CAV的感染性克隆及vp3完全缺失（pBluem2CAVVP3^-）和NLS2缺失（pBluem2CAVNLS2^-）的两个突变体。首先构建了含有CAV双拷贝基因组顺向串联的重组子，转染MDCC-MSB1细胞，获得了能够自我复制的CAV，体内试验显示该质粒注入鸡体内，可以引起与CAV感染相似的病理变化。又对vp3基因及vp3基因C端的核定位信号（Nuclear location signal NLS）进行缺失，分别构建了带有缺失的突变体pBluem2CAVVP3^-和pBluem2CAVNLS2^-，转染MDCC-MSB1细胞，初步证实vp3基因缺失后在体内体外均检测不到病毒复制，但vp3 C端NLS2缺失后在体外可以检测到病毒复制，而体内试验结果显示NLS2缺失的突变体可以引起鸡胸腺小体数目增多等变化。CAV感染性克隆的构建为获得纯化的病毒及研制新型疫苗奠定了基础，两个vp3基因突变体的构建为研究vp3基因功能及获得毒力减弱的病毒奠定了基础。