纳米金标记毛细管电泳超灵敏化学发光免疫分析及应用研究

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纳米技术是21世纪最重要的技术之一,它覆盖了多个领域,包括化学、物理、材料科学、工程学、生物学,甚至医学。在过去的十年里,纳米金(gold nanoparticles, AuNPs)在生物分子检测和临床诊断中的应用已经引起了高度重视,它具有易于合成和表面修饰、强大的催化效应和容易与生物分子结合等优良性质。毛细管电泳(capillary electrophoresis, CE)是一类以高压电场为驱动力,以毛细管为分离通道,以样品的多种特性为依据的高效分离分析技术,是继气相色谱(gas chromatography, GC)和高效液相色谱(high-performance liquid chromatography, HPLC)之后分析科学的又一重大进展。CE具有分离效率高、样品消耗量低、分析时间短等优点,是一种新颖的微量分离分析技术。化学发光免疫分析法(chemiluminescence immunoassay, CL-IA)用于定量检测复杂样品中的低浓度组分,已经广泛地应用于临床诊断研究。CE结合CL-IA将同时具有CE的高分离能力、CL的高灵敏检测和IA的高特异性,是分析复杂生物样品的有效手段。本文首次将AuNPs标记、CE-CL-IA结合起来,发展了一种新颖的化学发光免疫分析技术,主要研究内容和创新点如下:1.首次利用AuNPs作为CL标记物用于毛细管电泳化学发光免疫分析。AuNPs用来催化luminol-H2O2反应,产生强的CL信号。非竞争免疫反应后,免疫复合物和未反应的标记抗体(Ab*)经CE分离后先后流出毛细管,与CL试剂相遇产生发光信号。我们选择常见的人免疫球蛋白G(human immunoglobulin G, hIgG)作为目标抗原。在优化条件下,免疫复合物和Ab*在5min内得到良好的分离。hIgG的线性范围为0.008-5μg/mL (R=0.9950),检出限为1.14ng/mL(S/N=3)。IgG在人血清中的加标回收率在85.0-107.0%之间。该方法成功应用于病人血清中IgG的定量检测。2.首次发现诺氟沙星和环丙沙星能够显著提高luminol-H2O2化学发光体系的发光强度。基于这种现象,建立了一种CE-CL(?)高灵敏同时检测诺氟沙星和环丙沙星的新方法。对CE分离和CL检测条件的影响进行了系统研究。在优化条件下,诺氟沙星和环丙沙星在4.5 min内基线分离。诺氟沙星和环丙沙星的检出限(S/N=3)分别达到2.9×10-1。和1.1×10-12mol/L,在尿样分析中的定量限(S/N=10)分别为6.0×10-8和5.1×10-10mol/L。两种分析物日内和日间迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别不高于3.6%和6.3%(n=6)。两种分析物在人尿样中的加标回收率在91.0%和112.7%之间。该方法成功应用于两种分析物在人尿样中的分离分析和环丙沙星在人体中药代动力学的研究。
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