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双生病毒能够侵染多种经济作物,并给作物生产造成极大的损失,在我国的云南、广西和广东等省份的作物上已发现了多种双生病毒。为进一步了解双生病毒在我国的分布及危害情况,本论文对侵染海南杂草的双生病毒进行了分子鉴定及致病性研究。 从海南儋州表现黄花叶的黄花捻上采集到病毒样本Hn8、Hn40和Hn41,部分序列测定表明,它们为同一种双生病毒。对其中的Hn8分离物进行了DNA-A全长基因组的序列测定,全长为2749个核苷酸(nt)。Hn8与中国胜红蓟黄脉病毒(AJ558120)的相似最高(78%),而与其他双生病毒的同源性较低,表明Hn8是一种新病毒,命名为中国黄花捻黄花叶病毒(Sida yellow mosaic China virus,SiYMCNV)。在SiYMCNV分离物Hn8及Hn40和Hn41中还发现伴随有卫星DNAβ分子,序列测定表明Hn8、Hn40及Hn41的卫星DNAβ分子基因组全长分别为1346 nt,1341 nt和1346 nt(AJ810093-95),它们之间的序列相似性较高(高于84%),但与其它病毒的DNAβ分子差异较大,其中与胜红蓟黄脉病毒的DNAβ的相似性最高(47.8%)。 从海南海口表现曲叶的假马鞭上分离到了双生病毒,并对Hn30和Hn34两分离物进行了全长基因组序列测定,序列分析表明Hn30及Hn34与假马鞭曲叶病毒(Stachytarpheta leaf curl virus,StaLCV)分离物Hn5-4和Hn6-1有较高的相似性(高于93%),表明它们为StaLCV的分离物。在假马鞭样品中,均没有发现DNA-B或DNAβ。构建了StaLCV-[Hn5-4]DNA-A侵染性克隆并对其致病性进行了测定,发现单独接种Hn5-4 DNA-A即可在寄主植物上诱导产生典型的双生病毒病症状。对Hn5-4 DNA-A在寄主植物中与不同病毒的卫星DNAβ分子的互作进行了研究,结果表明Hn5-4能够支持不同DNAβ分子在本氏烟中的复制并能诱导产生不同的症状。 对采自海南症状表现为黄脉的胜红蓟样品上的双生病毒进行了研究,序列分析表明胜红蓟样品中的双生病毒都为中国胜红蓟黄脉病毒(Ageratum yellow vein China virus,AYVCNV)。在所有胜红蓟样品中都没有发现DNA-B组份,但发现了AYVCNV与DNAβ分子的重组分子(RecDNA-Aβ),根据RecDNA-Aβ分子中DNAβ的序列,设计引物对胜红蓟样品中可能存在的DNAβ进行了PCR扩增,结果在所采的样品中都能扩增到1.3kb的条带,对其中的Hn9、Hn12和Hn19分离物的1.3kb条带进行了序列测定,经与其它DNAβ分子比较,发现这些DNAβ分子与AYVV的DNAβ的相似性最高(高于79.6%)。分别构建了AYVCNV-[Hn2]和Hn19 DNAβ的侵染性克隆,致病性测定表明,单独接种Hn2 DNA-A不能诱导寄主产生症状,而将Hn2与Hn19 DNAβ混合接种