猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus,TGEV）是冠状病毒科、冠状病毒属成员，引起猪的传染性胃肠炎（Transmissible gastroenteritis TGE），死亡率很高，呈世界范围分布，严重危害养猪业的发展。TGEV与猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪呼吸道冠状病毒（PRCV）在临床症状上很相似，基因组结构上与TGEV具有较高的同源性，传统的方法很难鉴别。 为了鉴别诊断TGEV与PRCV及对TGEV进行流行病学调查，本研究采用原核表达系统（GST融合表达系统）表达TGEV纤突蛋白（S蛋白）中含有B和C抗原位点的多肽，并且制备了非放射性地高辛标记的核酸探针，通过斑点杂交（Dot-Blot）检测TGEV核酸RNA。 TGEV S蛋白可诱导产生中和抗体，是主要的保护性抗原，其N端抗原位点B和C在PRCV中缺失。根据GenBank TH-98株序列设计第1对引物，应用RT-PCR方法体外扩增TGEV TH-98株S基因5’端含有B、C抗原位点的片段（ts），大小为357bp，并将ts连接到pMD18-T载体上。序列分析结果为，该片段的核苷酸序列与TGEV其它分离株FS772／70、Miller、Purdue15、Pur46-Mad、133的同源性分别为96.92％、97.76％、98.88％、99.72％、99.44％；氨基酸同源性分别为94.92％、95.76％、97.46％、99.07％、98.31％，表明该片段在TGEV不同分离株中较为保守。将ts片段亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中，将鉴定为阳性的重组质粒转化到感受态细胞BL21（DE3）pLysS中。挑选含重组质粒pGEX-6P-ts的菌落，经IPTG（终浓度为0.2mmol／L）诱导后，SDS-PAGE分析目的蛋白与谷胱苷肽硫转移酶（GST大小约为26ku）融合后大小约为40ku，目的蛋白分子量约为13.2ku，与理论值相符。优化表达条件后表达量达37.9％。 TGEV S基因5’端285bp片段在TGEV分离株中较为保守，与其它冠状病毒同源性较低。根据GenBank TH-98株序列设计第2对引物，应用RT-PCR方法体外扩增该片段（命名为tp），琼脂糖凝胶纯化后测定其浓度和纯度，进行非放射性地高辛标记。对标记效率测定后，以带正电的尼龙膜为介质进行特异性和灵敏性检测，经非放射性自显影来显示靶核酸。本研究中探针tp检测到TGEV cDNA最低量为120pg。 本研究高效表达了TGEV含有B和C抗原位点的多肽片段（TS）。制备了TGEV非放射性标记的核酸探针，并初步应用于检测TGEV。二者为TGEV鉴别诊断、血清学调查奠定了基础。