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二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid，DHA)是一种极其重要的ω-3系列不饱和脂肪酸，具有抗心血管病、抗癌、降血脂、促进智力发育和保护视力等重要生理作用。裂殖壶菌（Schizochytrium）是一类类藻的海洋真菌，因其富含DHA，有重要的经济价值而备受关注。对裂殖壶菌DHA合成途径的研究将对提高裂殖壶菌的DHA含量有重要意义，因此本论文针对裂殖壶菌18S rDNA序列分析、遗传转化体系研究，克隆DHA合成相关基因并进行基因缺失等方面开展工作，为研究裂殖壶菌的DHA合成途径奠定基础。首先，本论文从裂殖壶菌Schizochytrium limacinum OUC88及以其为出发菌株经紫外诱变筛选的10个菌株中扩增出18S rDNA基因序列（序列长度为1751bp-1758bp），与GenBank中的18S rDNA序列比对分析。结果表明，S.limacinum OUC88以及10个派生菌株与同物种的Schizochytrium sp FJU-512(GenBank No.AY758384)、S. limacinum（GenBank No.AB022107）的同源性均在96%以上；与同属异种的S. mangrovei（GenBank No.DQ100293）只有93%的同源性。并通过计算遗传距离及构建系统进化树，结果显示种内诱变产生的细微变异小于同属内不同物种之间的变异，表明18S rDNA序列鉴定可作为诱变、转基因等基因工程育种后物种鉴定的有效方式。然后，作为建立遗传转化体系的基础，本论文研究Zeocin、两性霉素B（Amphotericin B）、G418、氯霉素（Cm）、氨苄青霉素（Amp）、卡那霉素（Km）、链霉素（Str）七种基因工程常用抗生素对裂殖壶菌Schizochytrium limacinum生长的影响。结果表明：S. limacinum对Zeocin最敏感，在2.5-4μg/ml Zeocin中成活率降至2.10-2.79%（P <0.01）；S. limacinum对两性霉素B、G418、氯霉素较敏感，在14-20μg/ml两性霉素B中的成活率降至5%以下（P<0.01），在140μg/ml G418中的成活率为2.08%（P<0.01），在25.5-68μg/ml氯霉素中成活率13%左右（P<0.05）；S. limacinum对氨苄青霉素、卡那霉素、链霉素不敏感，50-300μg/ml的氨苄青霉素、卡那霉素、链霉素不能抑制其生长，成活率仍在80%以上（P>0.05）。本研究为裂殖壶菌基因工程筛选标记的选择提供了实验基础。随后，本实验参考NCBI的Genbank数据库中报道的pks基因序列，克隆了裂殖壶菌OUC168（S. limacinum OUC168）的pks1（3908bp）和pks2（4272bp）基因。采用Zeocin作为抗性筛选标记，构建带有Zeocin抗性基因和部分pks基因的载体（pTEF1/Zeo-pks1-U-D、pTEF1/Zeo-pks1-M-D、 pTEF1/Zeo-pks2-U-D、pTEF1/Zeo-pks2-M-D），分别以pks1基因和pks2基因作为同源重组位点，通过电转化，得到6株转化菌株，经Zeocin抗性基因扩增及Southern blotting证实裂殖壶菌pks基因已成功实现定点突变。6株转化菌株分别为：一株pks1基因中缺失2452bp的菌株（pTEF1/Zeo-pks1-U-D转化株，1④），两株pks1基因中插入Zeocin抗性基因的菌株（pTEF1/Zeo-pks1-M-D转化株，2③和2④），两株pks2基因中缺失2689bp的菌株（pTEF1/Zeo-pks2-U-D转化株，3①和3④）和一株pks2基因中缺失1143bp的菌株（pTEF1/Zeo-pks2-M-D转化株，4③）。由于基因缺失和插入突变，6株转化菌株与S. limacinum OUC168比较，形态变化很大，细胞很小，细胞内没有脂肪粒，有的有异味；生长速度变慢，其中2④基本处于不生长状态，发酵培养6天后生物量最多的不足S. limacinum OUC168的一半，少的仅有0.5g/L左右；6株转化菌株合成DHA的PKS途径被打断，发酵6天后总脂含量和DHA含量都基本为零。本论文为研究裂殖壶菌DHA合成的特殊的PKS途径，以及揭示DHA合成途径中某些关键酶基因的功能和表达打下基础，为采用基因工程方法从根本上提高DHA产量，改造裂殖壶菌提供一条新的途径。