转化生长因子-β3联合牙髓干细胞在种植体骨结合中的作用

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目的探讨外源性TGF-β3联合体外培养的DPSCs在种植体骨结合中的作用。方法(1)采用酶解组织块法从新西兰幼兔牙髓组织中分离DPSCs,体外培养,光镜下行细胞形态学观察,将DPSCs传至P3,液氮储存待用;(2)将36只2月龄新西兰大白兔随机分为PBS组;DPSCs组;TGF-β3+DPSCs组,每组12只。在兔下颌前牙及磨牙区随机拔除两颗牙齿,在拔牙窝即刻植入种植体,PBS组植入Bio-Oss粗颗粒骨粉0.30g+PBS 20ul;DPSCs组植入Bio-Oss粗颗粒骨粉0.30g+1×108/L DPSCs 20ul;TGF-β3+DPSCs组植入Bio-Oss粗颗粒0.30g+80ng/L TGF-β3 20ul+1×108/L DPSCs20ul。DPSCs+TGF-β3组则植入1×108/L DPSCs 20ul+80ng/L TGF-β3 20ul。术后第四周、第八周分别处死新西兰大白兔各18只,行HE染色、茜素红染色检测成骨质量,行免疫组织化学法检测骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、I型胶原蛋白(collagenase-Ⅰ,COL-Ⅰ)及骨钙素(osteocalcin,OC)的表达,行骨形态计量学分析检测种植体周围骨板宽度(combined bone lamella width,CBLW)、骨结合率(implant bone contact rate,IBCR)、骨小梁宽度(trabecular width,TW)及骨小梁视野面积百分比(trabecular area,TA)。结果原代培养的兔DPSCs呈集落生长,多呈梭形或纺锤形,少数呈多角形;HE染色:术后4周,TGF-β3+DPSCs组在骨小梁数量、成骨细胞密度、新骨形成方面均明显强于其他两组,术后8周,新骨形成进一步增多;茜素红染色:术后4周,TGF-β3+DPSCs组较其他两组出现更多的红色钙化结节,术后8周,钙化结节进一步增多;免疫组织化学图像灰度分析显示:术后4周,TGF-β3+DPSCs组BSP、OC及COL-I指标为(0.35±0.04)、(0.36±0.03)及(0.39±0.01),DPSCs组BSP、OC及COL-I指标为(0.27±0.02)、(0.24±0.01)及(0.28±0.03),PBS组BSP、OC及COL-I指标为(0.13±0.03)、(0.15±0.02)及(0.16±0.02),术后8周,TGF-β3+DPSCs组BSP、OC及COL-I指标为(0.51±0.02)、(0.49±0.03)及(0.53±0.02),DPSCs组BSP、OC及COL-I指标为(0.35±0.02)、(0.37±0.01)及(0.38±0.01),PBS组BSP、OC及COL-I指标为(0.21±0.03)、(0.19±0.02)及(0.22±0.02),术后4周及8周,TGF-β3+DPSCs组BSP、OC及COL-I的表达均显著高于DPSCs组及PBS组(P<0.05),DPSCs组及PBS组差异无统计学意义(P>0.05)。;术后8周,TGF-β3+DPSCs组CBLW、IBCR、TW、TA均显著高于DPSC组及PBS组(P<0.05),DPSCs组及PBS组差异无统计学意义(P>0.05)。结论DPSCs具有高度增殖的生物学特性,并具有成骨向分化潜能;TGF-β3对DPSCs成骨向分化具有一定促进作用;TGF-β3联合DPSCs可有效促进种植体的骨结合。
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