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Linifanib (ABT-869)是一种多靶点的受体酪氨酸激酶抑制剂,主要选择性的作用于VEGFR和PDGFR家族。linifanib在临床前研究和II期临床试验中对肝癌表现出显著的抗肿瘤作用。但是,在Ⅲ期临床试验中,linifanib并未取得预期效果。同大多数分子靶向治疗药物类似,天然或获得性耐药的产生是其疗效不佳的原因。作为细胞对不利环境刺激的一种保护性机制,自噬在肿瘤细胞耐药过程中起着重要的作用。多种抗肿瘤治疗如化疗、放疗、生物靶向治疗等可以引起肿瘤细胞自噬。Linifanib疗效不佳的原因是否与诱导自噬,从而导致肿瘤细胞耐药的产生尚不清楚。目的研究linifanib对肝癌细胞自噬的影响及自噬的潜在功能；分析linifanib调节自噬的潜在分子机制；在此基础上观察调节自噬是否促进肝癌细胞对linifanib的敏感性。方法通过Western blot分析linifanib处理后肝癌细胞Bel-7404、HepG2中自噬关键基因表达情况；进一步采用免疫荧光、透射电镜观察linifanib处理后自噬潮、自噬体的变化情况；采用Western blot分析linifanib处理后肝癌细胞PDGFR-β及其下游Akt/mTOR和Mek/Erk表达情况；采用MTS方法观察自噬抑制剂或下调自噬关键基因ATG5、ATG7抑制自噬对linifanib的增敏作用；采用FcM观察细胞凋亡情况；采用肝癌裸鼠移植瘤模型观察自噬抑制剂对linifanib的增敏作用。结果linifanib在0～51μM浓度范围内对Bel-7404、HepG2肝癌细胞株有增殖抑制作用,在51μM浓度时作用于肝癌细胞24h、48h、72h后的抑制率分别为Bel-7404：(22.4±2.24)%、(26.2±3.61)%和(38.1±5.89)%；HepG2细胞分别为：(15.3±3.73)%,(17.2±3.89)%,(18.9±7.25)%。同时linifanib诱导肝癌细胞LC3I向LC3II转换增多,呈剂量依赖性和时间依赖性；自噬相关基因Beclin-1、ATG5、ATG7及自噬体增加。Linifanib抑制PDGFR-β及其下游Akt/mTOR和Mek/Erk磷酸化水平。基因干扰下调PDGFR-P表达使得肝癌细胞LC3I向LC3转换增多,p62降低。体外研究表明自噬抑制剂或下调自噬关键基因ATG5、ATG7抑制自噬促进linifanib对肝癌细胞的增殖抑制作用。Linifanib2.5μM联合CQ作用于Bel-7404和HepG2细胞24h后其抑制作用分别提高到(27±5.32)%、(25+3.2)%；联合3-MA其抑制作用分别提高到(26+6.21)%、(23±1.98)%,同单药组抑制率分别为(15+3.5)%、(13±2.2)%相比,p<0.05。联合siRNA ATG5,ATG7后,linifanib对Bel-7404细胞的抑制作用分别提高到(30.4±2.8)%、(24.8±8.7)%；HepG2细胞分别为(25.6±1.36)%、(27.2±2.05)%,而阴性对照组分别为(11.5±2.1)%、(13.7±±1.23)%(p<0.05)。流式细胞仪检测结果表明同linifanib单药时的凋亡率(9.8±±0.58)%相比,联合CQ和3-MA时,HepG2细胞凋亡率分别增加至(20.1士1.56)%和(25.3±±2.31)%,同单药组相比p<0.05。裸鼠移植瘤模型表明自噬抑制剂HCQ增加linifanib对肿瘤生长的抑制作用。Linifanib联合HCQ组抑制肿瘤更为明显,其第5,10天平均体积分别为6.91±±1.13mm3和170.4±77.63mm3。而linifanib组第5,10天平均体积分别为9.33+3.38mm3和330.4+125.1mm3。结论多靶点酪氨酸激酶抑制剂linifanib诱导肝癌细胞保护性自噬发生。下调PDGFR-β及其下游Akt/mTOR和Mek/Erk磷酸化是linifanib诱导保护性自噬的潜在机制。抑制自噬促进linifanib体内外对肝癌细胞的增殖抑制作用,提高细胞凋亡率,而并不增加肝脏毒性。抑制自噬使得肝癌细胞对linifanib的敏感性增加,联合自噬抑制剂可以作为肝癌治疗的一种新的策略。