【摘 要】
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目的:碘营养可影响甲状腺乳头状癌的发生和发展,但其分子机制目前尚未完全阐明。Mi R-200c参与了多种肿瘤的发生、发展,然而其在碘诱导的甲状腺肿瘤中的作用及分子机制尚不清楚。本研究旨在探讨碘营养通过影响miR-200c特异性表达从而影响甲状腺癌乳头状癌肿瘤细胞的生物学行为,为进一步研究碘对甲状腺乳头状癌的影响提供依据。方法:运用RT-qpcr方法检测人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1细胞系
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目的:碘营养可影响甲状腺乳头状癌的发生和发展,但其分子机制目前尚未完全阐明。Mi R-200c参与了多种肿瘤的发生、发展,然而其在碘诱导的甲状腺肿瘤中的作用及分子机制尚不清楚。本研究旨在探讨碘营养通过影响miR-200c特异性表达从而影响甲状腺癌乳头状癌肿瘤细胞的生物学行为,为进一步研究碘对甲状腺乳头状癌的影响提供依据。方法:运用RT-qpcr方法检测人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1细胞系与人甲状腺乳头状癌细胞TPC-1细胞系中miR-200c的表达以及不同浓度碘化钾刺激Nthy-ori 3-1细胞系及TPC-1细胞系48h后miR-200c表达水平的变化。通过基因预测网站预测miR-200c的靶基因可能为YWHAG,Western blot检测不同浓度碘化钾处理甲状腺乳头状癌细胞系后YWHAG的表达情况以及在TPC-1细胞系中,抑制miR-200c表达及增加miR-200c表达及对YWHAG表达水平的影响,并通过CCK-8法及划痕实验检测不同浓度碘化钾溶液刺激、miR-200c表达水平的差异对TPC-1细胞增殖和迁移的影响。结果:1.RT-qpcr结果提示:与Nthy-ori 3-1细胞系相比,miR-200c在TPC-1细胞系中的表达明显降低（P＜0.01）。2.用0μM、25μM、50μM、75μM不同浓度碘化钾分别处理Nthy-ori 3-1与TPC-1细胞48小时后,检测各组miR-200c表达情况:Nthy-ori 3-1细胞系中,各处理组miR-200c的表达无统计学差异（P＞0.05）;TPC-1细胞系中,50μM及75μM处理组较0μM处理组miR-200c的表达显著上调,具有统计学意义（P＜0.01）,而25μM处理组miR-200c的表达较0μM处理组则无显著统计学差异（P＞0.05）。3.通过RT-q PCR检测在TPC-1细胞中转染miR-200c模拟物后,mimics组的TPC-1细胞中miR-200c的表达水平较NC组显著升高（P＜0.001）,inhibitor组miR-200c的表达水平较NC组显著降低（P＜0.001）;而后进行western blot检测YWHAG的表达,结果显示miR-200c的上调.显著降低了YWHAG的表达,miR-200c表达抑制后,YWHAG的表达增加。4.用0μM、25μM、50μM、75μM不同浓度碘化钾处理TPC-1细胞系48h后,Western blot检测各组YWHAG的表达,结果提示:与0μM处理组比较,50μM及75μM碘化钾处理组的TPC-1细胞中的YWHAG的表达下调,而25μM处理组的YWHAG表达较对照组无明显差异。5.CCK-8法检测细胞增殖:不同浓度碘化钾溶液刺激TPC-1细胞系,分别记录0、12、24、36、48小时的增殖情况:TPC-1细胞的增殖率在25μM、50μM处理组及75μM处理组较对照组0μM均有提高（P＜0.05）。与mimics NC细胞相比,miR-200c过表达组能够明显增强TPC-1细胞的增殖,而抑制miR-200c表达则使TPC-1细胞的增殖受抑制。6.划痕实验检测细胞迁移:与对照组0μM相比,TPC-1细胞迁移率在50μM及75μM碘化钾处理组提高（P＜0.05）,而25μM碘化钾的TPC-1细胞的迁移率较对照组无明显变化（P＞0.05）。另外上调miR-200c的表达后,其迁移率较对照组显著提高,抑制miR-200c表达,细胞迁移率则降低。结论:1.高碘培养使得TPC-1细胞系中的miR-200c表达显著增加,而对Nthy-ori 3-1细胞系中的miR-200c的表达无明显影响;2.高浓度碘化钾刺激及miR-200c过表达均可促进TPC-1细胞增殖及迁移过程,提示miR-200c及高碘营养在甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移中的协同作用;3.miR-200c在甲状腺乳头状癌细胞中表达降低,其过表达通过靶向YWHAG促进甲状腺乳头状癌细胞的増殖和迁移。我们的研究进一步证明了高碘营养可以通过上调miR-200c表达从而影响甲状腺乳头状癌细胞生物学行为,其作为甲状腺癌潜在的分子诊断和治疗靶点的临床应用有待进一步研究。
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