本研究是在导师吴志奎研究员肾生髓理论现代研究与临床实践的学术思想指导下,以国家自然基金资助课题为依托,把中医的理论思维和前沿技术有机结合,对益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血的整体效应和疗效的分子机制进行研究。在该药取得显著临床疗效的基础上,采用ELISA、RT-PCR、激光共聚焦显微镜扫描技术、凝胶滞后试验、real-time PCR、DD RT-PCR等实验技术,从造血刺激因子的表达,β-珠蛋白基因簇LCR HS2序列DNA与蛋白质相互作用,珠蛋白基因表达调控发挥重要作用的红系特异的反式作用因子基因的表达,以及与红细胞溶血相关的铁蛋白基因表达等方面,多层次研究了益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血调控珠蛋白基因表达的分子机制,取得了有学术价值的研究结果。 一、理论研究 1、从肾生髓与藏精的内在关系、肾生髓与髓养骨、肾生髓通于脑以及肾生髓生血四个方面,对历代有关肾生髓理论的文献论述进行分析归纳,以期加深对经典肾生髓理论的认识。通过对近年来有关肾生髓理论现代研究的相关文献分析归纳,从肾生髓与神经系统功能的相关性、肾生髓和髓养骨物质基础的现代研究、肾生髓与髓生血的客观性研究和肾生髓理论分子机制的研究等方面,总结肾生髓理论的现代研究成果,为中医经典理论的现代研究探索新的思路和方法。 2、通过对珠蛋白基因簇的组织及表达的时空顺序性、珠蛋白基因的结构与表达、珠蛋白基因表达与红系分化起重要作用的转录因子、珠蛋白基因的顺式作用元件以及β-珠蛋白基因簇位点调控区的功能等方面分析归纳,了解珠蛋白基因表达调控的作用机制,更深入的认识珠蛋白生成障碍性贫血的发病机制,为临床研究提供理论依据;总结导师多年来的运用补肾生血中药治疗β-地中海贫血的研究成果,深入学习导师的学术思想和科研思路。 二、益髓生血颗粒调控珠蛋白及相关基因表达的研究 1、从两个方面对益髓生血颗粒治疗β-地中海贫血的整体效应进行了研究,研究结果如下:①采用随机单盲安慰剂平行对照进行临床观察,研究结果显示:治疗组血液学参数Hb、RBC、Ret、HbF自给药第1个月至治疗结束均明显提高,安慰剂对照组无明显变化;治疗组患者肝脾肿大明显缓解,B超显示患者脾脏横径治疗后明显小于治疗前;治疗后患者临床中医证候明