黑龙江省高粱靶斑病菌遗传多样性及侵染过程研究

来源 :黑龙江八一农垦大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zz121961437
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高粱靶斑病是高粱叶部重要的真菌病害,目前国内外对于高粱靶斑病报道较少。高粱是黑龙江省西部地区主要种植作物之一,在对高粱病害调查的过程中,发现一种叶部病害发生非常普遍且为害严重,疑似高粱靶斑病。本研究采集黑龙江省不同地点高粱病叶进行分离鉴定,确定为高粱靶斑病病菌,在此基础上,对病原菌的生物学特性、遗传多样性及侵染过程进行了研究,为进一步研究病害流行、病原菌的致病机制及病害防治奠定重要的理论基础。研究结果如下:1.采集黑龙江省不同地点高粱病叶,经组织分离获得病原菌纯培养,选择各地点1株菌进行柯赫氏法则验证,并利用形态学和分子生物学对病原物进行鉴定。结果表明,不同菌株形态特征一致,但菌落生长速率不同。供试菌株ITS序列与Bipolaris sorghicola(登录号AF071332.1)的同源性为99~100%,并与Bipolaris sorghicola在同一分支上。结合形态特征鉴定,确定病原为高粱生双极蠕孢菌(Bipolaris sorghicola),引起高粱靶斑病。2.研究不同菌株的生物学特性,结果表明,供试菌株在OMA培养基中长势最好,不同菌株的菌丝生长速率存在显著差异;供试菌株在10~35℃范围内能够生长,不同菌株最适生长温度不同;光照对菌丝生长有促进作用;pH 8最适病菌生长;对于适宜碳氮源的利用上,不同菌株间差异较大。3.利用rDNA-ITS引物和筛选出的SRAP、URP引物,研究供试菌株遗传多样性,并对菌株进行致病力测定。ITS测序结果聚类分析结果表明,48株菌均与高粱生双极蠕孢菌(Bipolaris sorghicola)处于同一分支,部分菌株在原分支基础上继续分支。SRAP、URP引物扩增条带聚类分析结果显示,相似系数在0.71时可将菌株分为7个类群,其中绥化市分离菌聚为LⅠ类群,哈尔滨分离菌聚为LⅥ类群,供试菌株间基因流动性较大,地理群体间遗传分化系数(Gst)和基因流(Nm)分别为0.3762、0.8290,表明9个地理群体间存在一定的遗传分化。48株菌对高粱致病力明显不同,病情指数为2.02~26.10,将病菌划分为强、中、弱3种致病型。黑龙江省高粱靶斑病菌存在遗传分化,且遗传关系复杂,供试菌株间致病力存在分化,致病力与遗传多样性不相关。4.探究高粱靶斑病菌接种条件。结果表明,高粱靶斑病菌最佳接种条件为孢子浓度5.0×10~4个/mL,30℃保湿18 h以上。5.利用光学显微镜研究了高粱靶斑病菌对抗、感高粱叶片的侵染过程。结果显示:感病品种中,病原菌分生孢子2 h即可萌发;18 h开始形成附着胞,侵入点多为细胞间隙、叶毛基部,少数为细胞表面,未见从气孔侵入;24 h细胞内部可见侵染菌丝;72 h叶片出现褪绿斑点,细胞内菌丝清晰可见;接菌96 h后分生孢子梗从气孔伸出,叶片表面可见典型病斑;抗病品种中,24 h形成附着胞,侵染率低,病菌由细胞间隙侵入;72 h细胞内部可见菌丝,菌丝无细胞间扩展现象。以上结果说明,高粱靶斑病菌直接侵入叶片,抗感品种病菌侵入过程有差异。
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