一株茶树内生放线菌的分离、鉴定及抗真菌活性物质研究

来源 :福建师范大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:jiekoala
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本研究从茶树内生真菌芒果球座菌(Guignardia mangiferae)菌落表面分离到一株放线菌命名为BF-01,并对菌株BF-01进行了以下几方面的研究:1、运用形态学及分子生物学方法对菌株BF-01进行鉴定;2、菌株BF-01抑菌谱的测定;3、抑菌活性物质的分离纯化。通过研究得出以下结果:1、本研究所用菌株BF-01分离于28℃下培养30~40d的茶树内生真菌芒果球座菌(Guignardia mangiferae)菌落表面。通过对菌株BF-01进行菌落观察及电镜观察其孢子和孢子丝等形态特征的研究,判定其为链霉菌属放线菌。提取菌株BF-01基因组DNA,扩增其16SrDNA保守序列,测序后进行序列比对并构建系统发育树。结果显示试验菌株BF-01与卡伍尔链霉菌(Streptomyces cavourensis subsp)在进化树上处于同一分支,即说明二者的亲缘性比较接近。结合形态学观察结果,初步判定菌株BF-01属于卡伍尔链霉菌(Streptomyces cavourensis subsp)。2、对菌株BF-01进行了一系列的抑菌活性及抑孢子活性测定:(1)平皿对峙试验显示,菌株BF-01对供试的7株茶树内生真菌和7株植物病原真菌都有很好的抑制效果,对菌株TN15、TN5、TN13、TN2-2的抑制率可高达90%以上;(2)发酵液抑菌试验显示,菌株BF-01的发酵原液对供试的7株茶树内生真菌及7株植物病原真菌中的13种都有不同程度的抑制作用,只有对木霉没有表现出抑制能力;(3)发酵液氯仿萃取液对5种病原细菌及白色念珠菌也有明显的抑制作用,SPSS软件进行差异显著性分析显示,均表现为效果极显著及显著。综上三种不同的抑菌试验表明,菌株BF-01具有广谱抑菌性。(4)发酵液氯仿萃取物对玉米茎腐病菌(Fusarium gramimearum)和蕉斑镰刀菌(Fusarium stoveri)的孢子发芽有很好的抑制效果,且随着萃取物浓度的增大,孢子发芽率在逐渐降低,即孢子发芽抑制率在逐渐增大。3、对菌株BF-01发酵液进行醇沉、氯仿萃取、薄层层析、硅胶柱层析等方法进行活性物质初步分离纯化,得到4个活性较高的组分,组分Ⅱ组分Ⅲ组分Ⅳ和组分Ⅷ,将组分Ⅷ进行进一步的葡聚糖凝胶LH-20柱层析分离后得到组分Ⅷ2具有较高的抑菌活性。对组分Ⅷ2的气相色谱/质谱(GC/MS)分析显示,分离到的活性化合物为2-Methyl-4-ethoxycarbonyl-3H-imidazo[]pyridazine-5,7-(6H)-dione(2-甲基-4-乙酯基-3H-咪唑[1,5-b]哒嗪-5,7-(6H)-二酮)命名为化合物A,和1-Phenyl-3-(2-pyridyl)-5-pyrazolon(1-苯基-3-(2-吡啶)-5-吡唑啉酮)命名为化合物B。它们是两种生物碱类杂环化合物,这两种化合物的基本骨架结构非常相似,而且这两种基本骨架结构在以往文献中都有大量报道,其具有很高的农药医药等应用价值。
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