【目的】　　研究白癜风（ Vitiligo ）患者TCRβ链（ T cell Receptor ） CDR3 （complementarity-determining region 3）的多样性和克隆型，进一步探讨不同的V基因使用情况或特异性使用CDR 3基因对白癜风的影响。　　【方法】　　1.外周血单个核细胞和白癜风患者皮肤组织的分离与提取　　取7例正常人的肝素化管，取10 ml全血，用Ficoll-Paque plus分离外周血单个核细胞(PBMC)。?密度梯度离心，用磷酸盐缓冲液冲洗两次。临床手术获得白癜风组织8例(详细病例资料见表1)，对照PBMC和病例组织同质细胞RNA按制造商的指示用Trizol试剂(Sigma，St.Louis，USA)提取纯化，用大容量cDNA逆转录试剂盒(大岛应用生物系统)从总RNA中提取cDNA，研究方案经XX医院伦理委员会批准。所有预期的人都获得书面知情同意。　　2.TCR基因β链V基因CDR 3序列的PCR扩增及文库构建　　用多重PCR方法扩增上述cDNA。分别获得TCRβ链V区侧翼序列，并进行文库分析。CDR 3碱基数据由Illumina Hisq 2000测序仪获得。通过与网站http：//imgt.cines.fr的比较，构建了标记的CDR 3片段VDJ基因家族，对表达谱进行了序列分析。　　【结果】　　1.CDR 3区VJ基因在病例及对照组中的应用　　为揭示白癜风患者T细胞免疫功能的特点，采用免疫酶联分析平台对白癜风患者组织中TCRβ链V区和J区及正常人PBMC进行了序列分析。我们从病例和对照中分别获得了高质量的22.286 million和16.833 million 个碱基序列。组装后，分别从病例组和对照组获得39407个克隆和76623个克隆，并进一步比对了V基因在病例和对照组中的表达情况，结果提示：TRBV 20-1、TRBV 7-9和TRBV 2高表达。在这些V基因使用中，TRBV 7-9在两组中均有明显表达。同时，我们还对两组进行了主成分分析(PCA)，这是将一组观测值转换为一组特殊值的统计方法,从结果看，病例与对照组V基因的使用比例有差异。经t检验统计学处理，发现TRBV 7-9、TRBV 25-1、TRBV 4-1和TRBV 12-5表达在病例组与对照组之间有显著变化。　　2.白癜风患者及对照组CDR 3长度分布特征　　为了评估TCR序列的多样性，我们分析了病例和对照组的CDR 3氨基酸长度分布。本研究从Illumina Hisq 2000序列平台获得了病例和对照的CDR 3序列。这一结果为TCRs的多样性提供了一个合理的方法。相比之下，唯一的克隆型只对每个克隆类型计算一次。因此，总克隆型呈现出不同的变化，独特的克隆型表现为一致，这说明根据个体的免疫情况，他们的表达量不尽相同。用氨基酸(AA)长度进行样本相关性比较，所有样本的相关系数均在0.85以上，无论是总克隆型长度分布还是唯一的克隆型长度分布。我们还比较了AA代码使用情况分布。　　3.白癜风患者及正常人TRBV库的克隆频率分布　　为了验证TCR序列的克隆分布特征，我们计算了每个克隆的表达频率。病例组和对照组的总阵挛数和>2阵挛数均无显着性差异，病例组的D50和D50频率分布高于对照组，同样的结果也体现在独特的克隆型数上。我们还进一步发现，白癜风患者的频率>0.5%倍扩张阵挛型(HEC)数明显高于对照组。　　4.白癜风患者与正常人TRBV基因高度扩增克隆型(HEC)的研究　　为评价白癜风患者与正常人之间克隆水平TCR库的克隆型复制情况，对高扩展克隆型(HEC)进行了计数。各组间差异无显着性，主成分分析(PCA)对HEC的下维度和PCA的差异均无显着性，我们还比较了前100位克隆型丰度频率分布[%]，log2，结果显示病例前100位克隆型明显高于对照组。　　【结论】　　1.提示b白癜风患者TCRβ链V基因的克隆型、特异性和多样性存在差异。　　2.TRBV 7-9克隆型或可作为白癜风患者诊断的有用指标。