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阿尔茨海默症(Alzheimersdisease,AD)是一种以记忆减退以及认知功能障碍为主要临床特征的神经退行性疾病。脑源性神经营养因子(brain-derivedneurotrophicfactor,BDNF)能调节突触可塑性,在神经元的生长,分化中发挥重要功能。促进BDNF的表达是AD药物开发的一个重要方向。滋阴中药的活性成分异菝葜皂苷元(smilagenin,SMI)和梓醇都能通过促进BDNF的生成而发挥神经保护功能。本文就SMI和梓醇调节BDNF表达的机制展开探讨。 我们以全反式维甲酸诱导分化的神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y为研究对象,研究SMI对β-淀粉样肽(β-amyloid,Aβ)损伤细胞的作用。首先我们确认了SMI能提高Aβ损伤细胞的存活率,以及显著促进BDNF的蛋白和mRNA表达的作用。接下来,对BDNF的转录速率和降解率的测定表明,SMI能促进Aβ损伤SH-SY5Y细胞BDNF的新生转录,但对其降解无显著影响。进一步对BDNFmRNA各转录子的测定结果显示,SMI主要促进包含外显子Ⅳ和Ⅵ的BDNF转录子表达。 考虑到cAMP反应元件结合蛋白(cAMPresponseelementbindingprotein,CREB)是调节转录子Ⅳ和Ⅵ表达的关键转录因子,我们对CREB和其活化形式磷酸化CREB(pCREB)的表达进行测定,结果显示,SMI能上调Aβ损伤SH-SY5Y细胞pCREB的含量。如用RNA干扰的方法阻断CREB的表达,则SMI促进BDNFmRNA和BDNF转录子Ⅳ和Ⅵ表达的作用完全消失。对促进CREB磷酸化的信号分子研究发现,SMI能促进Aβ损伤SH-SY5Y细胞的细胞外信号调节激酶(extracellularsignal-regulatedkinase,ERK)1/2磷酸化水平的升高,如用U0126阻断ERK1/2磷酸化,则SMI促进pCREB水平升高的作用完全消失。 最后,我们对梓醇影响BDNF表达的机制展开研究。我们观察到梓醇显著提高Aβ损伤SH-SY5Y细胞的存活率,促进BDNF的蛋白和mRNA表达。通过对BDNFmRNA转录子的测定,我们发现和SMI略有不同,梓醇主要促进的是转录子Ⅳ的表达,对转录子Ⅰ、Ⅱ和Ⅵ的表达没有显著影响。梓醇也能提高pCREB的含量,如用CREBsiRNA阻断CREB表达,则梓醇促进Aβ损伤SH-SY5Y细胞BDNFmRNA表达的作用部分消失。 综上所述,SMI和梓醇均能促进Aβ损伤神经细胞BDNF蛋白、mRNA和转录子Ⅳ的表达,促进CREB的磷酸化。我们的研究结果也提示,SMI主要通过ERK/CREB通路促进BDNF的新生转录;而对梓醇的机制研究发现,CREB可能部分参与了梓醇上调BDNFmRNA表达的作用。