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抗磷脂综合征(APS)是一种系统性自身免疫性疾病，血清抗磷脂抗体(aPL)阳性和血栓前状态为APS的两大重要血清学特征，这种血清学特征与栓塞的发生和病理妊娠密切相关。APS发病机制不明，血栓形成一直以来被认为是APS发病的重要因素，而内皮细胞活化则是血栓形成的重要原因。抗体浓度及感染与APS的发病及预后关系密切，国内外学者普遍认为中高浓度情况下，浓度越高、病情越重、预后越差，感染则可加重APS病情。导致此种现象的机制未明，内皮细胞是否参与其中，国内未见此方面研究。 aPL活化内皮细胞具有特定的信号传导通路，并非简单的磷脂结合途径。大部分aPL直接与β2糖蛋白(I)(β2GPI)结合，aPL/β2GPI复合物进一步结合于细胞表面。目前细胞的Toll样受体(TLR)信号传导通路尤其是TLR2和TLR4信号通路是研究的热点，国外研究发现TLR2参与aPL活化内皮细胞的信号传导中，而TLR4是否参与其中存在争议，国内未见相关研究。 内皮细胞活化后可分泌多种细胞因子，本文选择E-选择素(SELE)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素8(IL-8)四种常用且敏感的指标用以监测内皮细胞活化后的分泌功能，其中E-选择素mRNA表达量增加或降低时，其蛋白的表达水平发生相应的上调或下调，因此本文分别从mRNA及蛋白水平对E-选择素的表达进行检测，若二者的表达均增加或减少，则从一方面说明了实验结果正确性。本文所采用的aPL为从APS患者血清中提纯的IgG，为排除正常IgG对实验的影响，选择正常人群血清中提纯的IgG作为正常对照。 本文拟分为三个部分，第一部分体外培养脐静脉内皮细胞（HUVEC），分别用正常对照IgG及不同浓度APS患者IgG刺激细胞，探讨不同浓度aPL对内皮细胞分泌E-选择素、IL-6、IL-8、MCP-1的影响。第二部分探讨TNF-α干预下内皮细胞TLR2/4表达情况其TNF-α干预下aPL对血管内皮细胞分泌E-选择素、IL-6、IL-8、MCP-1的影响，进一步研究APS血管内皮细胞活化的机制，并为治疗APS提供新靶点。第三部分通过研究卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)对aPL刺激内皮细胞分泌E-选择素、IL-6、IL-8、MCP-1的影响，探讨BCG-PSN是否有可能成为治疗APS的新选择药物。 第一章不同浓度抗磷脂抗体对内皮细胞分泌E-选择素、IL-6、IL-8、MCP-1影响的研究 目的:观察不同浓度抗磷脂抗体对血管内皮细胞分泌功能的影响。 方法:体外培养人脐静脉内皮细胞，分别用PBS（空白组）、正常人血清提取的IgG（正常对照组）和不同浓度APS患者血清提取的IgG(APS IgG)（5％、10％和20％）干预细胞。采用实时荧光定量PCR及流式细胞学技术，检测细胞E-选择素的表达，采用酶联免疫吸附试验测定细胞分泌MCP-1、IL-6和IL-8的表达，采用Western blot检测内皮细胞TLR2和TLR4的表达。 结果:正常对照组内皮细胞SELE、MCP-1、IL-6和IL-8表达量与空白组比较，无统计学差异; APS IgG可诱导内皮细胞SELE、MCP-1、IL-6和IL-8表达增加，与空白组、正常对照组比较及不同浓度APS IgG组之间两两比较，差异有显著统计学意义;空白组、正常对照组及5％ APS IgG组两两比较，内皮细胞TLR2表达量无明显差异，10％及20％ APS IgG组TLR2表达量与空白组及正常对照组比较及两组之间比较，差异有统计学意义;各组之间TLR4表达量无明显差异。 结论:抗磷脂抗体刺激内皮细胞分泌E-选择素、IL-6、IL-8、MCP-1增加且作用具有浓度依赖性，浓度越高，作用越强。 第二章 TNF-α对内皮细胞TLR2/4表达的影响及APS发病机制的研究 目的:探讨TNF-α干预下aPL刺激内皮细胞分泌E-选择素、IL-6、IL-8、MCP-1的情况及TLR2和TLR4在抗磷脂抗体刺激内皮细胞分泌E-选择素、IL-6、IL-8、MCP-1中的作用。 方法: (1)一半细胞采用肿瘤坏死因子α（TNF-α）预刺激24小时后去除刺激因素8小时，一半细胞未经TNF-α预刺激但余处理相同，收集一部分TNF-α预刺激及未预刺激细胞，采用Western blot检测TNF-α预处理对内皮细胞TLR2和TLR4表达的影响，余下的TNF-α预刺激及未预刺激细胞分别用脂磷壁酸(LTA)、正常对照IgG及不同浓度APS IgG（5％、10％和20％）进行干预，采用实时荧光定量PCR及流式细胞学技术，检测细胞E-选择素的表达，采用酶联免疫吸附试验测定细胞分泌MCP-1、IL-6和IL-8的表达; (2)分别加入抗-TLR2或（和）抗-TLR4阻断抗体阻断TLR2或（和）TLR4信号传导通路后，用20％浓度APS IgG干预细胞，采用实时荧光定量PCR及流式细胞学技术，检测细胞E-选择素的表达，采用酶联免疫吸附试验测定细胞分泌MCP-1、IL-6和IL-8的表达。 结果:经TNF-α预刺激后，细胞TLR2表达量较未经TNF-α预刺激细胞明显增加，差异有统计学意义，TLR4表达量无明显变化;经TNF-α预处理及未预处理细胞均用TLR2特异性激动剂LTA进行干预，经TNF-α预处理组SELE、MCP-1、IL-6和IL-8表达量较未经TNF-α预处理组明显增高，差异有统计学意义;经TNF-α预刺激后再用同浓度APS IgG干预细胞，SELE、MCP-1、IL-6和IL-8表达量与仅用APS IgG干预组比较明显增高，差异有统计学意义，不同浓度APS IgG组与正常对照组四组之间两两比较，差异均有统计学意义;抗-TLR2+APS IgG组及抗-TLR2+抗-TLR4组内皮细胞SELE、MCP-1、IL-6和IL-8表达量，较APS IgG组明显降低，差异有统计学意义;抗-TIR4+ APS IgG组内皮细胞SELE、MCP-1、IL-6和IL-8表达量，与APS IgG组比较无明显改变，差异无统计学意义。 结论: (1)TNF-α干预下抗磷脂抗体刺激内皮细胞分泌E-选择素、IL-6、IL-8、MCP-1的作用增强。 (2)抗磷脂抗体通过TLR2信号传导通路刺激内皮细胞使其E-选择素、IL-6、IL-8、MCP-1分泌增加。 第三章卡介菌多糖核酸对抗磷脂抗体刺激内皮细胞分泌E-选择素、IL-6、IL-8、MCP-1的影响 目的:探讨卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)干预下抗磷脂抗体刺激内皮细胞分泌E-选择素、IL-6、IL-8、MCP-1的情况。 方法:用APS患者血清提取的IgG处理内皮细胞，APS IgG处理前预先加入不同浓度BCG-PSN（0、25、50和100μg/ml），采用实时荧光定量PCR及流式细胞学技术，检测细胞E-选择素表达，采用ELISA测定细胞分泌MCP-1、IL-6和IL-8的表达。 结果:BCG-PSN干预下APS IgG所诱导的内皮细胞SELE、MCP-1、IL-6和IL-8表达明显降低，APS IgG组及不同浓度BCG-PSN组之间两两比较，差异均有统计学意义。 结论:卡介菌多糖核酸干预下抗磷脂抗体刺激内皮细胞分泌E-选择素、IL-6、IL-8、MCP-1的作用减弱，提示它可以用于APS的治疗。