黑皮扁豆凝集素的分离纯化及部分性质研究

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黑皮扁豆(Dolichos purpureus L.var.)经粉碎、浸取、硫酸铵分段盐析、DEAE-52离子交换和Sephacryl S-300 HR分子筛层析可得到一表观分子量为155kD的甘露糖/葡萄糖专一的黑皮扁豆凝集素(Dolichos purpureus lectin,DPL),无血型专一性.天然状态下的DPL远紫外圆二色谱显示在213nm和226nm有双负峰,利用软件dicro 6.2中的神经网络法测得DPL二级结构中各构象单元的百分含量分别为:α-螺旋4﹪,β-折叠48﹪,无规则卷曲48﹪.在含8mol/L脲和不含脲的pH5.0,0.1mol/L的NaAc-Hac的缓冲体系中,用N-溴代丁二酰亚胺(NBS)修饰DPL的色氨酸残基.在含脲的体系中可修饰36个色氨酸残基;在不含脲的缓冲体系中可修饰12个色氨酸残基.用碘化钾、氯化铯和丙烯酰胺研究色氨酸残基的微环境发现,仅有丙烯酰胺有淬灭作用,能完全淬灭DPL的荧光,结合NBS修饰的结果,可知色氨酸残基一小部分位于分子表面的疏水环境中,其余的埋藏在分子的内部.
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