电离辐射对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的影响

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背景:瘢痕疙瘩有着过度生长、侵犯邻近组织、手术切除后极易复发、治疗效果不佳等特点,成为当今医学界面临的一个重大难题。目前已知与成纤维细胞增殖及凋亡平衡失调关系密切,所以人们采取各种方法来抑制成纤维细胞增殖并诱导其凋亡。有些学者发现电子线照射配合手术切除对瘢痕疙瘩十分有效,然而由于对电子线照射的作用机理和安全系数方面未达成共识,导致治疗效果也相差甚远,因此临床上未能广泛应用。  目的:探讨电离辐射对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡方面的生物学影响。  方法:1.细胞培养:手术取4例瘢痕疙瘩(耳垂、大腿、前胸、上臂各1例,均为南京医科大学友谊医院手术病例,按文献方法进行成纤维细胞原代培养,待细胞融合后传代,实验所用细胞均为4~8代处于对数生长期的瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblast, KF),分别定量接种于培养皿或96孔板中。2.电离辐射:选用6Mev电子线,采用单次大剂量(500cGy,1000cGy,1500cGy,2000cGy)及不同的分割方式(常规分割:200cGy/f,5f/w;大分割:500cGy/f,3f/w)分别对瘢痕疙瘩成纤维细胞进行照射。3.细胞活性检测:观察细胞损伤的形态学变化;细胞计数法绘制细胞生长曲线;四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞增殖活性。4.细胞周期及凋亡检测:应用流式细胞术(flow cytometry, FCM)观察各组细胞周期变化及凋亡百分率。  结果:1.单次大剂量1000cGy,1500cGy,2000cGy照射后24h、48h、72h,瘢痕疙瘩成纤维细胞出现增殖活性持续下降,下降程度与照射剂量成正比。2.常规分割组(200cGy/f,5f/w)与大分割组(500cGy/f,3f/w)分别照射至DT=2000cGy时,瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖活性明显下降(P<0.05),大分割组下降更明显(P<0.05)。3.流式细胞术检测结果表明,电子线照射可诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞产生凋亡,以1000cGy,1500cGy照射时凋亡率最大(P<0.01),随后增加剂量,凋亡率反而下降。4.电子线照射后24h,瘢痕疙瘩成纤维细胞出现明显S期阻滞,以1000cGy,1500cGy照射后S期阻滞最明显(P<0.05),随后增加剂量,S期细胞数目迅速下降。  结论:1.电子线治疗瘢痕疙瘩的作用机制:抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖并诱导凋亡。2.1000-1500cGy是一个安全有效的剂量范围。3.采用大分割方式治疗瘢痕疙瘩的疗效可能优于常规分割方式。
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