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第一部分慢性应激对急性酒精中毒所致中枢抑制作用的影响目的:酒精是一种广泛用于情绪低落者“自我治疗”的饮料,可快速改善其情绪。抑郁症患者的饮酒行为显著高于健康人群。然而,抑郁状态下长期饮酒会增加酗酒行为,引起酒精成瘾和急性酒精中毒。到目前为止,慢性应激对酒精中毒的作用鲜有报道。乙醇是酒精最主要的化学成分。因此,本部分研究旨在探讨慢性应激对乙醇引起C57BL/6J小鼠急性酒精中毒行为学的影响。方法:采用慢性不可预见性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)和慢性社会挫败应激(chronic social defeat stress,CSDS)模型诱导C57BL/6J小鼠抑郁样行为;采用糖水偏好实验(sucrose preference test,SPT)、悬尾实验(tail suspension test,TST)、新型摄食抑制实验(novelty-suppressed feeding test,NSFT)和社会接触实验(social interaction,SI)行为学实验评价C57BL/6J小鼠抑郁样行为;利用翻正反射消失(loss of righting reflex,LORR)、体温测量和转棒实验,分别评价小鼠急性酒精诱导的镇静催眠、核心体温降低和共济失调。结果:(1)CUMS诱导C57BL/6J小鼠抑郁样行为后观察其对急性酒精中毒行为的影响:CUMS延长乙醇(4.0 g/kg)诱导C57BL/6J小鼠LORR的持续时间(Control:54.1±3.8 min;CUMS:69.3±5.1 min,P<0.01 vs Control);CUMS加重乙醇(3.0 g/kg)诱导的核心体温降低(Control:-2.1±0.2℃;CUMS:-2.8±0.2℃,P<0.05 vs Control);CUMS显著增加C57BL/6J小鼠在乙醇(1.75 g/kg)注射前后从转棒掉落潜伏期的差值(Control:-20.9±4.2 sec;CUMS:-39.8±6.2 sec;P<0.05 vs Control);(2)CSDS诱导抑郁样行为,观察其对C57BL/6J小鼠急性酒精中毒行为的影响:与对照组相比(37.8±4.1 min),CSDS LORR持续时间延长(62.3±5.0 min;P<0.001 vs Control);CSDS增加酒精注射前后体温差值(Control:-1.2±0.2℃;CSDS:-2.0±0.2℃,P<0.01 vs Control);CSDS显著加重酒精诱导的共济失调行为(Control:-25.1±3.1 sec;CUMS:-44.2±5.6 sec,P<0.01 vs Control)。结论:慢性应激增强酒精中毒所致中枢抑制作用,CSDS和CUMS两种应激模型均加重小鼠急性酒精中毒行为:表现为延长LORR持续时间,加强酒精对核心体温的抑制作用并明显加重共济失调行为。第二部分慢性应激对酒精抗抑郁样效应的影响目的:越来越多的研究显示NMDA受体抑制剂具有快速抗抑郁效应,而乙醇是N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)的变构抑制剂,已有文献报道,乙醇在正常小鼠上有快速起效的抗抑郁样作用。那么,在慢性应激所致的抑郁状态下,乙醇是否也有快速抗抑郁作用呢?目前还没有相关研究报道。因此,本部分主要探讨乙醇及其代谢产物乙醛在生理状态和慢性应激状态下的抗抑郁效应。方法:采用强迫游泳检测(forced swimming test,FST)和TST,研究乙醇和乙醛在正常C57BL/6J小鼠上的抗抑郁效应,采用CSDS模型诱导小鼠抑郁样行为,通过社会接触实验评估乙醇和乙醛对CSDS诱导的抑郁样行为的作用。结果:(1)乙醇(2.5 g/kg)降低小鼠在FST的不动时间(NS组:110.2±5.6 sec;2.5 g/kg组:88.5±2.9 sec,P<0.01 vs NS)和TST不动时间(NS组:146.1±6.5 sec;2.5 g/kg组:118.5±8.0 sec;P<0.05 vs NS);(2)乙醇(2.5 g/kg)不影响CSDS诱导的抑郁样行为;(3)乙醛(100 mg/kg)降低小鼠TST不动时间(NS组:148.6±3.6 sec;100 mg/kg组:111.5±9.4 sec,P<0.001 vs NS);(4)乙醛(100mg/kg)给药30 min(NS组:121.2±7.0%;ACD组:142.2±7.2%;CSDS+NS组:74.0±5.7%;CSDS+ACD组:107.8±7.0%)和24 h(NS组:184.7±19.2%;ACD组:166.9±17.0%;CSDS+NS组:59.2±12.4%;CSDS+ACD组:186.8±24.4%)均改善CSDS诱导的社会逃避行为。结论:乙醇(2.5 g/kg)和乙醛(100 mg/kg)对正常C57BL/6J小鼠具有快速抗抑郁效应。乙醇(2.5 g/kg)不影响CSDS诱导的抑郁样行为,而乙醛(100 mg/kg)则明显改善CSDS诱导的抑郁样行为,提示慢性应激条件下乙醇的抗抑郁样作用被减弱,但其体内代谢产物乙醛的抗抑郁样作用不受影响。第三部分慢性应激双向调节酒精中枢效应的分子机制目的:乙醇进入体内后,主要在肝脏中通过乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)代谢为乙醛,乙醛进一步由乙醛脱氢酶(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH)代谢为乙酸。而在大脑中,乙醇主要通过过氧化氢酶(Catalase)氧化为乙醛并经过ALDH进一步氧化为乙酸。慢性应激条件下,乙醇在体内转化为乙醛的能力是否会发生改变呢?目前还未有研究报道。因此,本部分主要以乙醇相关代谢酶为线索探讨慢性应激对酒精中枢效应双向调控作用的分子机制。方法:采用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)和Western blotting实验方法检测CSDS和CUMS模型小鼠肝脏、海马脑区中相关酒精代谢酶的m RNA和蛋白质水平;活性试剂盒检测CSDS和CUMS模型小鼠海马脑区和肝脏中酒精代谢酶的活性变化。结果:(1)q RT-PCR实验发现CSDS(Control:100±9.2%;CSDS:55.8±5.8%,P<0.001vs Control)和CUMS(Control:100±5.8%;CUMS:58.1±9.0%;P<0.001 vs Control)模型小鼠肝脏中ALDH-1 m RNA表达水平较对照组降低,但其蛋白表达水平和活性并无明显变化,两种抑郁模型小鼠肝脏中ADH1的表达和活性均无显著变化;(2)CUMS与CSDS均降低小鼠海马脑区Catalase的m RNA表达水平(Control:100±3.8%,CUMS:84.1±4.7%;P<0.05 vs Control;Control:100±2.6%,CSDS:84.8±4.1%;P<0.01 vs Control),但不影响ALDH-2的m RNA水平;(3)CUMS显著降低海马Nrf2核内表达量(Control:100±2.7%;CUMS:82.73±4.2%,P<0.01 vs Control),同时CUMS显著降低小鼠海马Catalase的活性至对照组的66.5±5.5%(P<0.05 vs Control);(4)叠氮化钠和氨基三唑(3-Amino-1,2,4-triazole,3-AT)加重C57BL/6J小鼠急性酒精中毒行为学:与溶剂组相比,叠氮化钠(10 mg/kg)和3-AT(1 g/kg)均延长C57BL/6J小鼠酒精诱导LORR的持续时间(NS:31.3±1.2 min;Sodium azide:44.3±2.1 min;3-AT:53.9±4.5 min);叠氮化钠和3-AT加重酒精导致的C57BL/6J小鼠核心体温降低(NS:-2.3±0.1℃;Sodium azide:-3.0±0.1℃;3-AT:-3.3±0.1℃);叠氮化钠和3-AT显著加重酒精诱导的共济失调,并降低C57BL/6J小鼠从转棒掉落的潜伏期(NS:-26.1±3.2 sec;Sodium azide:52.9±5.1 sec;3-AT:-44.5±3.5 sec)。结论:慢性应激降低小鼠中枢而非外周酒精代谢能力,Nrf2-Catalase信号通路参与慢性应激对酒精中枢抑制作用的调控,上调Nrf2-Catalase信号通路逆转CUMS对对酒精中枢抑制作用的增强效应。